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转化生长因子1(transforming growth factor beta 1,TGF-β 1)通过影响始基卵泡库的维持、早期卵泡发育、颗粒细胞增殖与分化、卵母细胞成熟及胚胎着床在哺乳动物繁殖过程中发挥重要作用。但是TGF-β1是否参与人排卵前颗粒细胞增殖与分化的调节并不清楚。而颗粒细胞是支持卵细胞发育的重要细胞类型,影响卵泡启动、发育、成熟、排出及闭锁的全过程。因此,在目前的研究中,我们想确定TGF-β 1是否参与人颗粒细胞的增殖与分化及排卵过程。我们研究发现,TGF-β1可以促进人颗粒细胞细胞外基质相关基因PTX3、TNFAIP6的表达,并呈现时间效应和浓度效应。使用TGF-β 1抑制剂LY364947干扰TGF-β 1信号通路,TGF-β 1对PTX3、TNFAIP6的促进作用可以被抑制。ADAMTS-1是新近发现的含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶,通过裂解versican参与排卵过程,ADAMTS-1缺陷可导致排卵障碍。因此我们想确定TGF-β 1能否通过调控ADAMTS-1及versican的表达而参与排卵过程。我们研究发现,TGF-β1可以抑制人颗粒细胞ADAMTS-1的表达,并呈现时间效应和浓度效应。使用TGF-β 1抑制剂LY364947可以部分恢复TGF-β 1对ADAMTS-1表达的抑制作用。TGF-β 1可以促进人颗粒细胞versican的表达,并呈现时间效应和浓度效应。使用TGF-β 1抑制剂LY364947干扰TGF-β 1信号通路,TGF-β 1对versican的促进作用可以被抑制。总之,我们的研究表明TGF-β 1可以通过smad2/smad3信号通路促进颗粒细胞细胞外基质的增殖,并通调节ADAMTS-1及versican参与排卵过程。第一部分 TGF-β1促进颗粒细胞中PTX3、TNFAIP6的表达目的:检测TGF-β 1对颗粒细胞中PTX3表达的调控。方法:选择行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗的患者12例,提取卵泡液中颗粒细胞进行体外培养,随机分成TGF-β 1、LY364947处理组和对照组,处理组分别加入1ng/m1、5ng/m1、10ng/m1 的TGF-β 1和 1uM的LY364947;时间对照组分别予以5ng/ml TGF-β 1处理Oh、6h、12h、24h、48h。通过qRT-PCR和western blotting技术检测各组PTX3、TNFAIP6在颗粒细胞的表达情况。结果:(1)qRT-PCR结果显示,TGF-β 1促进颗粒细胞PTX3、TNFAIP6 mRNA的表达,并呈现浓度梯度和时间效应。(2)western blot结果显示,TGF-β 1促进颗粒细胞PTX3、TNFAIP6蛋白的表达,并呈现浓度梯度和时间效应。结论:TGF-β 1促进颗粒细胞PTX3、TNFAIP6的表达。第二部分 TGF-β1抑制颗粒细胞中ADAMTS-1的表达目的:检测TGF-β 1对颗粒细胞中ADAMTS-1及versican表达的调控。方法:选择行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗的患者12例,提取卵泡液中颗粒细胞进行体外培养,随机分成TGF-β 1、LY364947处理组和对照组,处理组分别加入lng/ml、5ng/ml、10ng/ml 的TGF-β 1和 luM的LY364947;时间对照组分别予以5ng/ml TGF-β 1处理Oh、6h、12h、24h、48h。通过qRT-PCR和western blotting技术检测各组ADAMTS-1在颗粒细胞的表达情况。结果:(1)qRT-PCR结果显示,TGF-β 1抑制颗粒细胞ADAMTS-1 mRNA的表达,并呈现浓度梯度和时间效应。(2)western blot结果显示,TGF-β 1抑制颗粒细胞ADAMTS-1蛋白的表达,并呈现浓度梯度和时间效应。结论:TGF-β 1抑制颗粒细胞ADAMTS-1的表达。第三部分 TGF-β 1促进颗粒细胞中versican的表达目的:检测TGF-β 1对颗粒细胞中versican表达的调控。方法:选择行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗的患者12例,提取卵泡液中颗粒细胞进行体外培养,随机分成TGF-β 1、LY364947处理组和对照组,处理组分别加入1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml 的TGF-β 1和 1uM的LY364947;时间对照组分别予以5ng/ml TGF-β 1处理Oh、6h、12h、24h、48h。通过qRT-PCR和western blotting技术检测各组versican在颗粒细胞的表达情况。结果:(1)qRT-PCR结果显示,TGF-β 1促进颗粒细胞versican mRNA的表达,并呈现浓度梯度和时间效应。(2)western blot结果显示,TGF-β 1促进颗粒细胞versican蛋白的表达,并呈现浓度梯度和时间效应。结论:TGF-β 1促进颗粒细胞versican的表达。