猪链球菌2型(Streptococcussuis 2,SS2)是威胁养猪业的一种重要的致病菌,据文献报道,已造成全球范围内超过两千多人感染发病,严重的引起死亡,更曾经在我国的江苏和四川爆发过两次较大规模的猪链球菌病,给养殖业以及人类的生命安全造成了巨大的威胁。猪链球菌感染后会引起病猪及人临床上表现出关节炎,心内膜炎,脑膜炎以及败血症等症状,猪链球菌的感染会引起宿主免疫系统的激活,导致宿主释放出大量的炎性因子来清除病原体,有助于宿主抵抗猪链球菌的侵袭,但是过量的免疫反应可能会导致宿主产生败血性休克。有研究显示,猪链球菌中存在一些促炎组分在病原菌感染宿主引起败血症过程中可能发挥了很重要的作用。本研究就发现了一个有明显促炎效果的猪链球菌2型表面蛋白,并将该蛋白作为研究对象,对其引起炎症反应的具体机制展开进一步研究,以期为控制猪链球菌病情提供一些依据。本研究是以SSU05 1856基因编码的猪链球菌2型胞外蛋白HP1856为研究对象,具体研究内容如下:1)以pET-28a质粒构建重组载体,体外表达并纯化该蛋白;2)对纯化的蛋白进行去除内毒素处理后以RAW264.7细胞为模型开展细胞实验,发现该蛋白能刺激RAW264.7细胞引起较高水平的促炎性细胞因子IL-1β,TNF-α,MCP1以及IFN-β的释放;3)分别通过TLR2、TLR4的特性型抗体以及TLR2、TLR4基因缺失小鼠进行试验发现HP1856蛋白刺激RAW264.7引起的IL-1β、TNF-α上调能被TLR4的特异性抗体所抑制,却不能被TLR2的特异性抗抑制;基因缺失小鼠实验推测该蛋白引起的的细胞因子的上调可能是TLR4依赖性的;4)随后使用相关信号通路抑制剂进行信号通路中间分子的验证,荧光定量结果表明HP1856激活IL-1β、TNF-α、MCPI和IFN-β可能主要是通过NF-K B和PI3K。5)为了更好的研究该蛋白的功能,实验中构建了该基因的过表达菌株,将该基因成功的进行了过表达,测定了过表达菌株的生长曲线,结果显示过表达菌株与亲本菌株在生长速率方面没有明显的差异;6)体外评价了过表达菌株对RAW264.7细胞的促炎效果,结果显示过表达菌株相对于亲本菌株的促炎效果更明显,提示过表达菌株中该蛋白的表达有助于宿主产生较强的炎症反应;7)随后进行的小鼠实验感染机体后血液含菌量结果表明过表达菌株感染组后血液含菌量高于亲本菌株对照组,这表明在SS2致病过程中,该蛋白的存在使得机体血液中清除病原体速率变缓,有助于导致宿主产生更严重的败血性休克。综上所述,重组蛋白HP1856是一个有明显促炎效果的促炎组分,在2型猪链球菌致病过程中发挥着一定的作用,希望通过研究该蛋白的致病机制可以为猪链球菌的防治提供新的视野及思路。