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背景:急性呼吸窘迫综合征(Acute respiratory distress syndrome,ARDS)是一种重症呼吸系统疾病,其病死率仍高达35-46%。目前,ARDS的治疗方法十分有限。对于ARDS病理机制和治疗措施的研究一直是危重病医学的重点和难点。其中,肺泡上皮细胞受损是ARDS重要的病理基础。当ARDS发生后,肺组织内大量表达肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-alpha,TNF-α),启动TNF-α介导的细胞死亡信号通路,损伤肺泡上皮细胞。双调蛋白(Amphiregulin,Areg)是表皮生长因子家族的一员,能够通过激活表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)信号通路,促进细胞增殖、抑制细胞凋亡。有研究表明,Areg能够减轻肺组织急性损伤,但是其中的机制并不清楚。因此,我们推测,Areg能够通过激活EGFR信号通路,抑制TNF-α介导的细胞死亡信号通路,进而减轻TNF-α对于肺泡上皮细胞的损伤,保护肺组织。目的:探究Areg对TNF-α所致肺泡上皮细胞损伤作用及机制。方法:本实验分为两部分。在细胞实验中,选用小鼠肺泡上皮细胞系(MLE12细胞),随机分为对照组(Control)、Areg组(Areg)、PBS+TNF-α组(PBS+TNF-α)、Areg+TNF-α组(Areg+TNF-α)、siRNA-Scramble组(si-Scr)、siRNA-EGFR组(si-EGFR)。Control组给予Areg等体积的PBS;Areg组给予Areg(50 ng/m L);PBS+TNF-α组:给予Areg等体积的PBS,孵育30 min后再给予TNF-α(100 ng/m L);Areg+TNF-α组:给予Areg(50 ng/m L),孵育30 min后再给予TNF-α(100 ng/m L);siRNA-Scramble组:将含有Scramble siRNA的Opti-MEM和含有Lipofectamine3000的Opti-MEM混合后,孵育10-15 min,将混合液加入细胞中培养,4-6 h后更换为含10%FBS的DMEM/F12培养基,继续培养24 h后,给予Areg(50 ng/m L),孵育30 min后再给予TNF-α(100 ng/m L);siRNA-EGFR组:将含有EGFR-siRNA的Opti-MEM和含有Lipofectamine 3000的Opti-MEM混合后,孵育10-15 min,将混合液加入细胞中培养,4-6 h后更换为含10%FBS的DMEM/F12培养基,继续培养24 h后,给予Areg(50 ng/m L),孵育30 min后再给予TNF-α(100 ng/m L)。采用TUNEL免疫荧光实验、CCK-8实验以及LDH释放实验,比较各组肺泡上皮细胞凋亡情况,Western Blot检测EGFR信号通路及TNF-α介导的细胞死亡信号通路激活情况。在动物实验中,选取6-8周龄、20-25 g雄性C57BL/6小鼠,随机分为对照组(Control)、Areg组(Areg)、PBS+LPS组(PBS+LPS)、Areg+LPS组(Areg+LPS)。Control组腹腔注射与Areg等体积的PBS溶液;Areg组腹腔注射Areg(5μg/只);PBS+LPS组:腹腔注射与Areg等体积的PBS溶液,30 min后气管滴注LPS(3mg/kg);Areg+LPS组:腹腔注射Areg(5μg/只),30 min后气管滴注LPS(3 mg/kg)。比较各组肺损伤评分,肺泡灌洗液中蛋白水平以及Ig M含量,肺泡灌洗液中中性粒细胞数量、IL-6以及TNF-α含量,Western Blot检测EGFR信号通路及TNF-α介导的细胞死亡信号通路激活情况。结果:1.Areg能够减轻LPS所致小鼠肺组织病理学损伤,改善小鼠肺组织屏障功能,减轻小鼠肺组织炎症反应;2.Areg能够减轻TNF-α所致小鼠肺泡上皮细胞损伤;3.Areg能够促进小鼠肺组织及小鼠肺泡上皮细胞中EGFR、AKT磷酸化,抑制Caspase 3、Caspase 8、Caspase 9活化;4.siRNA下调EGFR后消除了Areg对小鼠肺泡上皮细胞的保护作用;5.siRNA下调EGFR抑制了小鼠肺泡上皮细胞中EGFR、AKT磷酸化,促进了Caspase 3、Caspase 8、Caspase 9活化。结论:Areg能够通过激活EGFR信号通路,抑制TNF-α介导的细胞“死亡信号”通路,减轻TNF-α对小鼠肺泡上皮细胞的损伤作用。