杜鹃兰种子萌发中细胞及其物质变化研究

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本研究以异株异花授粉所得杜鹃兰种子为试验材料,通过控制采收时间、贮藏方式、消毒条件和基础培养基等,探究了影响其萌发的主要因素,比较不同处理下杜鹃兰种子的萌发率、种子特征及种胚生活力等,以提高杜鹃兰种子萌发率。在此基础上,通过观察种子萌发过程中不同阶段的外观形态特征及内部细胞组织化学变化,结合不同阶段内源物质含量变化趋势,探究杜鹃兰种子萌发到形成幼苗不同阶段的物质动态变化。主要研究结果如下:(1)以杜鹃兰种子为材料,以萌发率为测定指标,分析不同采收时间、贮藏方式、消毒处理及基础培养基种类等因素对杜鹃兰种子萌发的影响。结果表明:杜鹃兰种子的最佳采收时期为授粉后120 d左右。采收后的种子在4℃条件下贮藏对其萌发率及种胚质量影响小,同时低温贮藏能提高种子萌发率,但贮藏时间不宜超过1年;种子采用2.5%的Na Cl O溶液处理10 min,可以提高萌发率,但Na Cl O浓度过高或处理时间过长对种胚伤害较大;半固体培养基更利于杜鹃兰种子萌发,萌发率在培养60 d后急剧增加,在培养90 d后达到最大值;在MS培养基中具较高的种子萌发率和原球茎发育,比KC培养基更快,萌发率可达53.25%。(2)以萌发过程中不同阶段的种子为材料,研究种子萌发过程中形态结构和解剖结构变化情况,结果发现:种子萌发时,种胚吸水膨胀,体积增加,球形胚出现极性,突破种皮形成原球茎,由顶端小细胞和底端大细胞组成。顶端的细胞形成顶端分生组织,其细胞强烈分裂,形成叶原基,同时在原球茎基部观察到单细胞假根,主要参与吸收营养。随后叶原基和根原基分化形成片状叶及幼根,幼苗。根据结构变化特征将杜鹃兰种子萌发过程划分为6个发育阶段:未成熟种子阶段;种皮破裂,露出球形胚阶段;原球茎形成阶段;可见叶原基和假根的原球茎阶段;第一片叶分化阶段;幼苗阶段。(3)以萌发过程中不同阶段种子为材料,通过组织化学定位及含量测定方法观察种胚内源物质变化,结果表明:原球茎形成的所有阶段都观察到淀粉颗粒的存在,种子萌发过程中细胞内蛋白质分布逐渐减少,在原球茎形成阶段蛋白质主要分布于顶端分生组织及基部等生长活跃部位;脂质体含量伴随液泡的逐渐增大而不断减少,主要分布在原球茎基部,可能是为根的形成伸长提供营养。同时,可溶性糖含量呈显著上升的趋势,可溶性蛋白含量呈下降-升高-下降的趋势,游离氨基酸含量呈先下降后上升趋势。ABA含量随种子萌发急剧下降;在打破种子休眠及原球茎形成阶段GA3含量增加;ZR主要在原球茎顶端合成叶绿素、诱导叶原基细胞分裂分化及形成子叶时增加明显,后期处于稳定水平;IAA含量在种胚吸水膨胀阶段增加,与细胞的分裂伸长有关。SOD和POD活性变化呈显著升高趋势,而CAT活性总体下降。
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