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胚胎生殖细胞(Embryonic germ cells，EG cells)是来源于原始生殖细胞的具有多能j性的干细胞，目前，小鼠和人胚胎生殖细胞的分离培养均取得了一些重大进展，但是，j昆明小鼠的EG细胞系尚未建立，人EG细胞无血清培养体系尚未完善。因此，研究昆明小鼠和人EG细胞无血清培养体系，对于建立小鼠和人的EG细胞系及促进人EG细胞的临床应用，都具有十分重要的现实意义。
为了完善昆明系小鼠和人EG细胞无血清培养体系，本试验进行了以下研究：1 从消化酶浓度及消化时间，对昆明小鼠原始生殖细胞的分离培养进行研究；2 探讨不同培养液对昆明小鼠原始生殖细胞体外培养的影响；3 比较了MEF和不同来源的人胎儿成纤维细胞作为饲养层，培养人EG细胞的效果；4 比较了不同传代方法对培养人EG细胞的影响，并对分离得到的人和小鼠的EG细胞进行了初步鉴定。
1.昆明系小鼠胚胎生殖细胞的无血清培养在消化小鼠生殖嵴时，使用O.125％胰酶+0.02％EDTA在室温搅拌消化20min或37℃搅拌消化10 min均可，效果显著优于使用0.25％胰酶+0.04％EDTA和0.05％胰酶+0.008％EDTA两种不同浓度的消化液；在无血清培养基中添加0.1mmol/L RA；使用条件培养基MEF-CM和GR-CM，均能得到较多的小鼠PGCs阳性集落。MEF-CM和GR-CM与细胞因子组(LIF和bFGF)相比，效果差异不显著，但降低了培养基的成本。使用GR-CM和细胞因子LIF和bFGF组合都将昆明系小鼠EG细胞传至第六代；从10.5～12.5dpc小鼠胎儿中可以分离培养出较多PGCs集落，并能得到较多的传代培养集落。对所得到的昆明小鼠EG细胞进行鉴定，AP染色和SSEA-1、Oct-4均呈阳性。
2.人胚胎生殖细胞的无血清培养MEF和人胎儿生殖嵴源的hEF2比人胎儿皮肤源的hEF1更适合作为人EG细胞体外培养的饲养层细胞，能够得到较多的PGCs原代阳性集落数和较高的平均传代数；人EG细胞传代时，使用手工剥离后分割集落方法可以获得较高的集落形成率，并能培养较多的代数。手工剥离加消化和先消化饲养层再消化集落方法也获得了较好的效果，连同饲养层一起消化传代的效果最差；8～10周龄胎儿是最适合分离培养人EG细胞的。对所得到的人EG细胞进行鉴定，AP染色、SSEA-1、SSEA-3、SSEA-4、TRA-1-60和TRA-1-81、Oct-4均呈阳性。