两株海洋放线菌次生代谢产物及其抗水果病原菌活性研究

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由古巴尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum f.sp.cubense,FOC)引发的香蕉枯萎病和胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)引发的芒果炭疽病是我国热区两种严重的农业病害,严重影响我国热区经济,造成了巨大的损失。在众多的防治方法中,化学防治法可谓最直接有效,然而,目前尚无防治这两种病害的有效药剂。天然产物由于具有低毒、高选择性等特点,成为药物先导结构的主要来源。微生物是重要的天然抗生素来源之一,而海洋放线菌作为一类巨大的微生物类群,在抗生素药物开发中具有较大的潜力,被认为在产生临床有用的抗生素方面具有前所未有的潜能。因此,从海洋放线菌次生代谢中寻找抗农业病原菌先导化合物具有巨大的潜力。本研究通过与香蕉枯萎病菌进行平板对峙实验,从120株海洋放线菌中,筛选获得6株香蕉枯萎病菌拮抗菌株。通过化学多样性与生物活性相结合的方法,筛选其中菌株HNWSW-3为研究对象,对其次生代谢产物及其抗农业病原菌活性研究。同时,在研究组前期工作基础上,对一株芒果炭疽病菌拮抗放线菌HNWSW-49进行研究。采用减压/加压正反相硅胶柱色谱、凝胶(Sephadex LH-20)柱色谱及制备型HPLC等分离技术,对菌株次生代谢产物进行分离;通过波谱数据分析,结合理化常数对化合物的结构进行鉴定。从菌株HNWSW-3发酵产物中分离鉴定了 4个化合物,分别为 Staurosporine(1),4’-N-demethyl-ST(2),RK-1409(3),Tjipana-zole G1(4);从菌株HNWSW-49中分离鉴定了 7个化合物,分别为环—(苯丙—丙)二肽(5),环—(亮—甘)二肽(6),环—(苯丙—缬)二肽(7),环—(羟脯—苯丙)二肽(8),N-(2-苯基)乙酰胺(9),β-腺苷(10)和2-哌啶酮(11)。利用梯度稀释法对所得单体化合物进行抗香蕉枯萎病菌及芒果炭疽病菌活性测试,结果表明化合物1~3具有良好的抗芒果炭疽病菌活性,MIC分别为6.7 nM、13.8 nM、52.1 nM,其中化合物1同时具有抗香蕉枯萎病菌活性,MIC为26.8 nM。利用细胞生物学方法,对化合物1的抗香蕉枯萎病菌和芒果炭疽病菌作用机制进行研究,发现化合物1对香蕉枯萎病菌的作用机制是抑制孢子的萌发和抑制角鲨烯的合成以阻碍细胞膜的生成;而对芒果炭疽病菌的作用机制是破坏细胞膜的结构。
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