【摘 要】
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奶牛乳房炎是一种由于乳腺组织损伤感染而导致的奶牛所产牛奶品质下降、产量降低的疾病。各地区养殖场的病原菌由于气候、饲养管理情况以及奶牛自身因素等的影响表现出较大的差异。目前临床上对乳房炎的治疗仍存在未明确主要病原菌的情况下滥用抗生素的情况,造成了极大程度的药物残留以及病原菌的耐药性增高。本研究采集了陕西地区的3个奶牛养殖场的126份奶牛乳房炎乳样,分离鉴定乳样中的主要病原菌并对高检出的蜡样芽孢杆菌、
【基金项目】
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“牛疫病防制及检测诊断技术研究”横向项目（编号:K4030219194）；
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奶牛乳房炎是一种由于乳腺组织损伤感染而导致的奶牛所产牛奶品质下降、产量降低的疾病。各地区养殖场的病原菌由于气候、饲养管理情况以及奶牛自身因素等的影响表现出较大的差异。目前临床上对乳房炎的治疗仍存在未明确主要病原菌的情况下滥用抗生素的情况,造成了极大程度的药物残留以及病原菌的耐药性增高。本研究采集了陕西地区的3个奶牛养殖场的126份奶牛乳房炎乳样,分离鉴定乳样中的主要病原菌并对高检出的蜡样芽孢杆菌、产色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌进行生化鉴定和耐药性检测,建立这3种病原菌的三重PCR检测方法。主要结果如下:1.乳房炎乳样中主要病原菌的分离鉴定及耐药性检测无菌采集126份乳房炎乳样,分离到366株细菌,主要病原菌占56.24%,依次包括葡萄球菌属（12.02%）、链球菌属（10.92%）、肠杆菌属（10.65%）、芽孢杆菌属（6.83%）以及克雷伯氏菌属（6.55%）等,其中蜡样芽孢杆菌（6.83%）、肺炎克雷伯氏菌（6.28%）、产色葡萄球菌（4.92%）均占有较大比例,这3种细菌的生化鉴定与16S r DNA测序结果一致。耐药性检测结果表明,3种细菌均出现了一定程度的耐药,100%的蜡样芽孢杆菌存在四重耐药,对呋喃唑酮、卡那霉素、庆大霉素、青霉素均耐药。2.奶牛乳房炎主要病原菌三重PCR方法的建立分别以蜡样芽孢杆菌、肺炎克雷伯氏菌和产色葡萄球菌的DNA为模板,针对蜡样芽孢杆菌的溶血素基因（hbl A）、肺炎克雷伯氏菌的溶血酵素基因（khe）、产色葡萄球菌的超氧化物歧化酶（sod A）合成引物,通过对扩增条件的优化,结果表明退火温度为54℃,BC-hbl A、KP-khe、SC-sod A引物浓度分别为0.6μmol/L、0.1μmol/L和0.2μmol/L时扩增效果最好,成功建立了3种主要病原菌的三重PCR检测方法。特异性试验显示除这3种菌以外,E.coli、Pasteurella、S.aureus、S.treptococcus、C.perfringens、C.septicum检测结果均为阴性。灵敏度试验显示该方法对蜡样芽孢杆菌、肺炎克雷伯氏菌以及产色葡萄球菌DNA的最低检测量为35.76 pg/μL、40.2 pg/μL和6.28 pg/μL。应用该方法检测16份乳房炎乳样,结果与分离鉴定结果相符。综上所述,本研究初步了解了陕西部分奶牛场奶牛乳房炎的主要病原菌及其耐药情况,并建立了针对主要病原菌的三重PCR方法,为奶牛乳房炎的防控提供了科学资料和快速诊断方法。
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