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骨质疏松(Osteoporosis)是以骨量减少,骨组织微观结构退化,致使骨脆性增加以及易于发生骨折为特征的一种全身性骨骼系统疾病。根据世界卫生组织的报道,骨质疏松的发病率和死亡率已位于非感染性疾病的第四位,仅次于心血管疾病、肿瘤和糖尿病之后,成为当前世界性的主要公共健康问题。 绝经后的妇女骨质疏松的发病率高达50%,因而是骨质疏松防治的重点。其病因明确,是由于雌激素水平降低造成的,因此植物雌激素是当前防治绝经后骨质疏松的首选药物,此疗法即为雌激素替代疗法。雌激素在骨重建中起着非常重要的作用。 中药是我国人民几千年经验与智慧的结晶,中医药防治与骨质疏松症相类似临床症状的骨萎、骨痹证已有千余年的历史。中医药治疗骨质疏松症的机理既不同于西药的骨吸收抑制剂,也不同于骨形成促进剂,而是注重对机体整体的调节,作用于多个环节,从而改善机体的激素失衡和负钙平衡,达到标本兼治的效果。 本实验室前期对卷柏化学成分进行了全面系统的研究,从中分离得到大量的黄酮类、木脂素类、核苷类和其他多酚类化合物成分。前期研究发现,卷柏具有雌激素样作用。 本实验在前期研究基础上,通过体外细胞筛选结合整体动物实验的方法,探讨新的提取方法对卷柏雌激素活性的影响,筛选其雌激素活性部位,并对其抗骨质疏松作用及其活性部位进行研究,为进一步研究卷柏抗骨质疏松作用的活性成分和作用机理奠定基础。 第一部分卷柏提取物雌激素活性筛选的实验研究 目的:评价卷柏的雌激素活性,并探讨卷柏具有雌激素样作用的活性部位。 方法:采用小鼠子宫增重实验,观察用药前后小鼠子宫系数和体重变化情况;采用MTT法检测卷柏对MCF-7细胞增殖作用的影响,综合评价筛选出雌激素活性最强的部位。 结果:小鼠子宫增重试验中,卷柏总部位可使小鼠子宫系数明显升高,与正常组比有极显著性差异(P<0.01);MCF-7细胞增殖试验中,卷柏总部位和80%乙醇部位细胞增殖明显,与正常组比较有极显著性性差异(P<0.01),且80%乙醇部位组用药量远小于总部位组。 结论:本提取方法提取的卷柏具有较强的雌激素样作用,且总部位雌激素活性最强。 第二部分卷柏提取物对去势骨质疏松大鼠模型作用的实验研究 目的:评价卷柏的抗骨质疏松作用,并探讨其抗骨质疏松作用的活性部位。 方法:采用去势大鼠模型,观察用药后大鼠各项生化指标及其骨生物力学的变化;采用UMR106细胞模型,观察卷柏提取物对其增值分化的影响,综合评价卷柏的抗骨质疏松作用。 结果:动物实验中,卷柏总部位组和80%乙醇部位组作用比较明显,且80%乙醇部位组用药量明显低于总部位组,是总部位组用药量的1/4。细胞实验中,总部位组和80%乙醇部位组作用比较明显,与正常组比有极显著性差异(P<0.01),且80%乙醇部位组用药量低于总部位组。 结论:卷柏提取物对骨代谢有一定的调节作用,能够提高血清雌激素水平,提示卷柏提取物对骨质疏松症有一定的预防和治疗作用。推测其作用机理可能是通过调节体内激素水平来实现的;80%乙醇部位组可能是其活性部位。