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三叶崖爬藤(又名:三叶青)是葡萄科崖爬藤属植物,是中国特有的珍稀药用植物,主要分布于我国的南部地区。作为一种民间流行的中草药,其具有祛风化痰、清热解毒、活血止痛等多种活性。根据现代药理学研究表明三叶青具有显著的抗肿瘤、抗炎症和保肝作用。目前为止,有关三叶青中植物化学物的化学组成、吸收代谢,抗氧化、抗肿瘤等作用及其机制不清,且有限的研究也多集中于其块根,而对叶片的研究更少。因此,建立快速、准确、高效的分析方法来了解三叶青的主要活性成分及其在体内外的消化、代谢规律,通过化学、细胞和动物模型来探究三叶青的生理功能及其作用机制,对充分开发利用三叶青资源都是十分必要的。本研究采用不同极性溶剂(80%甲醇、乙酸乙酯、正己烷)对三叶青进行提取,并以体外化学(DPPH、ABTS、FRAP)和细胞(MTT法)方法来筛选其活性最高的提取物;通过联合使用化学方法、超高效液相串联飞行质谱技术和超高效液相三重串联四极杆质谱技术来快速准确定性定量分析该提取物中的植物化学物;通过体外模拟消化、肠道微生物发酵和大鼠模型来探究其活性成分在体内外的消化吸收和代谢规律;通过细胞和动物模型探究三叶青活性成分的抗氧化活性和抗肿瘤效果,了解其抑制癌细胞增殖和诱导凋亡的分子机制。主要的研究结果如下:1.以抗氧化活性(DPPH、ABTS、FRAP)和抗细胞增殖(MTT法)为指标,发现三叶青根部和叶片不同极性提取物都显现较强的抗氧化活性,且以80%甲醇提取物的抗氧化活性最高(根部:DPPH:2.76 mmol trolox/g DW,ABTS:1.34mmol trolox/g DW,FRAP:1.15 mmol Fe SO4/g DW;叶片:DPPH:3.32 mmol trolox/g DW,ABTS:1.38 mmol trolox/g DW,FRAP:1.85 mmol Fe SO4/g DW),初步推断80%甲醇提取物含有较高的活性成分。2.通过联合使用化学方法、超高效液相串联飞行质谱技术和超高效液相三重串联四极杆质谱技术对三叶青根部和叶片80%甲醇提取物的化学成分进行定性定量分析。从三叶青根部80%甲醇提取物中鉴定出58种化学成分,而从叶片提取物中鉴定出75种化学成分。通过回归分析发现三叶青80%甲醇提取物的总酚和黄酮含量与其抗氧化和抗增殖活性呈正相关。根部提取物主要活性成分含量为kaempferol-rutinoside(21.63 mg/g DW)、rutin(11.17 mg/g DW)、isoquercitrin(6.38 mg/g DW)和catechin(5.78 mg/g DW)。叶片提取物主要活性成分含量为5-caffeoylquinic acid(38.47 mg/g DW)、orientin(11.30 mg/g DW)、isovitexin(10.94 mg/g DW)、vitexin-2″-rhamnoside(10.21 mg/g DW)、isoorientin(10.17 mg/g DW)和vitexin(8.28 mg/g DW)。3.通过联合使用化学方法、超高效液相串联飞行质谱技术和超高效液相三重串联四极杆质谱技术对三叶青酚类在体外模拟消化和人肠道微生物发酵过程中的变化进行定性定量分析。结果表明,三叶青酚类成分在模拟胃肠道消化过程中不断被降解和代谢,从而进一步被机体吸收。4.通过超高效液相串联飞行时间质谱技术研究了三叶青提取物灌服大鼠后其血液和尿液中的代谢产物。发现根部提取物有20种成分被吸收,且有18种代谢产物;叶片提取物有30种成分被吸收和26种代谢产物。从代谢产物结构可以推断,三叶青根部和叶片提取物中的酚类主要通过去糖基化、羟基化、还原反应、水解作用、去甲基化和失去氧作用等第一阶段代谢反应和甲基化、硫酸盐化和葡萄糖醛酸化作用等第二阶段的代谢反应被机体吸收和代谢。5.通过建立大鼠氧化损伤衰老模型,探究了三叶青提取物在体内的抗氧化活性。结果表明三叶青叶片和根部提取物能明显提高大鼠机体的抗氧化能力,降低机体内MDA含量,增高T-AOC、SOD、GSH-Px水平,同时升高GSH含量。6.三叶青叶片酚类成分能够抑制Hep G2细胞的增殖和诱导该细胞凋亡。其作用的分子机制是通过外源性的死亡受体通路和内源性的线粒体通路共同诱导Hep G2细胞的凋亡,从而发挥其抗癌活性。此外,其抗癌机制也与MAPK通路有关。7.以H22荷瘤小鼠为模型,三叶青根部和叶片的酚类提取物(250和500mg/kg BW)均展现出较强的肿瘤抑制效果,其抑瘤率分别为23.53-45.52%和22.25-51.92%。其体内抗肿瘤机制可能是多重机制:一是通过调节Bcl-2家族蛋白的表达、激活Caspase家族蛋白来诱导肿瘤细胞凋亡;二是通过提高机体T淋巴细胞数量、CD4+/CD8+比例、NK细胞数量、TNF-α和IL-2水平来改善小鼠的免疫系统;三是通过提高机体抗氧化酶的活力和防止脂质过氧化造成正常细胞的损伤。此外,三叶青酚类可以通过抑制血管内皮细胞生长因子的产生来阻止肿瘤血管的生成。