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OAS/RNase L信号通路是细胞内抵御外源RNA病毒入侵的先天性免疫信号通路，它能够识别病毒遗传物质，介导病毒RNA或是细胞RNA的降解，进而阻止病毒感染。
RNA病毒入侵细胞后，细胞内的2-5寡聚腺苷酸合成酶(2-5-oligoadenylate synthetase，OAS)能够识别病毒的dsRNA并被激活，活化的OAS会以ATP为底物产生以2-5磷酸二酯键相连的寡聚腺苷酸，即2-5-oligoadenylate(2-5A)。产生的2-5A作为第二信使，能结合核糖核酸内切酶(RNase L)，RNase L在结合2-5A后能由无活性的单体状态变为有活性的双体状态，有活性的RNase L能降解细胞内单链RNA，抑制蛋白质的合成，以此来达到阻止病毒感染的目的。
在人类细胞中一共表达四种OAS，分别为OAS1，OAS2，OAS3以及OASL，OAS1和OASL含有1个OAS单元，但OASL没有催化活性;OAS2，OAS3分别含有2，3个OAS单元。
目前，对于OAS1，已经解出的结构有:人源hOAS1与一个18bp dsRNA的复合物，猪源pOAS1的apo形式以及分别与激活剂dsRNA和底物类似物ApCpp的复合物;对于OAS3，已经解出的结构为人源hOAS3中的第一个OAS单元DⅠ结构域(DⅠdomain)与一个19bp dsRNA的复合物。相关文献报导，OAS1，OAS2，OAS3这三个具有催化活性的OAS家族成员中，在人体内主要识别dsRNA以及合成2-5A的为OAS3，OAS3的催化结构域是否与OAS1的有所差别，或是其不具有催化活性的N末端DⅠ，DⅡ结构域是否对其有催化活性的DⅢ结构域有影响，也尚未清楚。因此，若能获得相关的OAS1，OAS3的可溶蛋白并获得其晶体，对其进行X射线衍射，解析其结构，将对研究OAS家族催化机制提供结构基础，为进一步研究细胞抗病毒功能提供重要的理论指导。
研究内容与结果如下:
(1)本文通过尝试不同的载体，获得了可大量表达人源hOAS1的重组质粒OAS1-346-pMCSG68，而后通过亲和柱，分子筛等纯化方式获得了较纯的hOAS1。通过悬滴法筛选出了适合hOAS1晶体生长的条件，并通过X射线衍射获得了不含有激活剂dsRNA的apo-hOAS1。将其与猪源的apo-pOAS1作比较，虽然同源性高达80％，但仍有一些与催化活性有关的氨基酸的侧链走向以及一些loop环构象的不同，特别是在RNA结合的区域，因此获得人源apo-OAS1的结构，对于进一步研究OAS1的结构与催化机制十分重要。
(2)本文通过筛选一系列OAS3具有催化活性的DⅢ结构域片段，将其与不同的载体相连接，获得表达量高且可溶性好的C端含有组氨酸标签的OAS3-DⅢ结构域重组蛋白OAS3-736-1087，而后通过亲和柱，离子交换柱，分子筛等纯化步骤，获得了浓度约10mg/mL的蛋白，通过悬滴法，筛选OAS3-DⅢ结构域合适的晶体生长条件，获得晶体，通过改变pH，沉淀剂浓度等方法，对晶体进行优化。另外，本文还提纯了OAS3的DⅠ结构域，并研究其与OAS3-DⅢ结构域是否存在直接的相互作用。
RNA病毒入侵细胞后，细胞内的2-5寡聚腺苷酸合成酶(2-5-oligoadenylate synthetase，OAS)能够识别病毒的dsRNA并被激活，活化的OAS会以ATP为底物产生以2-5磷酸二酯键相连的寡聚腺苷酸，即2-5-oligoadenylate(2-5A)。产生的2-5A作为第二信使，能结合核糖核酸内切酶(RNase L)，RNase L在结合2-5A后能由无活性的单体状态变为有活性的双体状态，有活性的RNase L能降解细胞内单链RNA，抑制蛋白质的合成，以此来达到阻止病毒感染的目的。
在人类细胞中一共表达四种OAS，分别为OAS1，OAS2，OAS3以及OASL，OAS1和OASL含有1个OAS单元，但OASL没有催化活性;OAS2，OAS3分别含有2，3个OAS单元。
目前，对于OAS1，已经解出的结构有:人源hOAS1与一个18bp dsRNA的复合物，猪源pOAS1的apo形式以及分别与激活剂dsRNA和底物类似物ApCpp的复合物;对于OAS3，已经解出的结构为人源hOAS3中的第一个OAS单元DⅠ结构域(DⅠdomain)与一个19bp dsRNA的复合物。相关文献报导，OAS1，OAS2，OAS3这三个具有催化活性的OAS家族成员中，在人体内主要识别dsRNA以及合成2-5A的为OAS3，OAS3的催化结构域是否与OAS1的有所差别，或是其不具有催化活性的N末端DⅠ，DⅡ结构域是否对其有催化活性的DⅢ结构域有影响，也尚未清楚。因此，若能获得相关的OAS1，OAS3的可溶蛋白并获得其晶体，对其进行X射线衍射，解析其结构，将对研究OAS家族催化机制提供结构基础，为进一步研究细胞抗病毒功能提供重要的理论指导。
研究内容与结果如下:
(1)本文通过尝试不同的载体，获得了可大量表达人源hOAS1的重组质粒OAS1-346-pMCSG68，而后通过亲和柱，分子筛等纯化方式获得了较纯的hOAS1。通过悬滴法筛选出了适合hOAS1晶体生长的条件，并通过X射线衍射获得了不含有激活剂dsRNA的apo-hOAS1。将其与猪源的apo-pOAS1作比较，虽然同源性高达80％，但仍有一些与催化活性有关的氨基酸的侧链走向以及一些loop环构象的不同，特别是在RNA结合的区域，因此获得人源apo-OAS1的结构，对于进一步研究OAS1的结构与催化机制十分重要。
(2)本文通过筛选一系列OAS3具有催化活性的DⅢ结构域片段，将其与不同的载体相连接，获得表达量高且可溶性好的C端含有组氨酸标签的OAS3-DⅢ结构域重组蛋白OAS3-736-1087，而后通过亲和柱，离子交换柱，分子筛等纯化步骤，获得了浓度约10mg/mL的蛋白，通过悬滴法，筛选OAS3-DⅢ结构域合适的晶体生长条件，获得晶体，通过改变pH，沉淀剂浓度等方法，对晶体进行优化。另外，本文还提纯了OAS3的DⅠ结构域，并研究其与OAS3-DⅢ结构域是否存在直接的相互作用。