【摘 要】
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本研究采用具有低毒性、较大体表面积、良好生物相容性、粒径易于合成从30nm到1OOnm并且易于生物大分子结合特点的中空金纳米粒(Hollow gold nanospheres,HAuNs)作为主要材料;硫辛酸(Lipoic acid,TA)与具有质子海绵效应的聚乙烯亚胺(Polyethylenimine,PEI 2kDa)反应获得聚乙烯亚胺-硫辛酸(PEI-TA)再连接到HAuNs表面,从而构建了
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本研究采用具有低毒性、较大体表面积、良好生物相容性、粒径易于合成从30nm到1OOnm并且易于生物大分子结合特点的中空金纳米粒(Hollow gold nanospheres,HAuNs)作为主要材料;硫辛酸(Lipoic acid,TA)与具有质子海绵效应的聚乙烯亚胺(Polyethylenimine,PEI 2kDa)反应获得聚乙烯亚胺-硫辛酸(PEI-TA)再连接到HAuNs表面,从而构建了中空金纳米粒接枝物/DNA复合物纳米粒基因给药系统;由于中空金纳米粒在近红外区域的激光照射,可以将光能高效转换为热能导致Au-S共价键断裂,进而实现有效的基因转染和体内外抗肿瘤疗效。采用氧化还原法,以硼氢化钠(NaBH4)为还原剂、柠檬酸钠(CitrateNa)作为稳定剂并在氩气的保护下制备30-100nm的中空金纳米粒(Hollow gold nanospheres,HAuNs)。以碳二亚胺(EDC)为交联耦合剂合成聚乙烯亚胺-硫辛酸接枝物(PEI-TA),并以核磁共振氢谱、红外光谱鉴定接枝物的化学结构;然后通过共价键键合作用得到HAuNs-PEI,测得粒径100nm,表面电位为40mV;通过四氮唑盐比色法(MTTAssay)测得此种载体的IC50为203.1839ug/ml。以荧光质粒DNA(pEGFP-C1)为报告基因,筛选此种载体与DNA的最佳密接比例。而后在HEK-293、HeLa细胞系进行体外细胞转染实验,以PEI(2kDa)和PEI(25kDa)作为阴性与阳性对照,同时设置激光组及未照射激光组。转染实验表明,HAuNs-PEI于转染48h后有绿色荧光蛋白表达,且明显强于单独的PEI(2kDa);与此同时照射激光组的表达效果明显强于未照射激光组,表达率接近于PEI(25kDa)。细胞毒性研究表明,HAuNs-PEI接枝物照射激光前后的细胞毒性明显小于阳性对照。采用罗丹明B(Rhodamine B,RITC B)标记 HAuNs-PEI,FAM 标记 DNA,Hoechst33342标记细胞核,Lysotracker标记溶酶体,通过激光共聚焦观察激光照射前后对DNA从溶酶体逃逸以及载体对DNA的释放情况,研究表明激光照射组相对于未照射激光组能够促进DNA从溶酶体逃逸并且加快载体对DNA的释放作用。
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