目的1、建立检测服用小剂量甲氨蝶呤（methotrexate,MTX）的类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）患者红细胞中多聚谷氨酸化甲氨蝶呤（methotrexate polyglutamates,MTXPGs）浓度的方法。2、分析溶质载体有机阴离子转运蛋白家族成员1B1（the solute carrier organic anion transporter family member 1B1,SLCO1B1）388A>G 和 521 T>C 基因多态性与RA患者红细胞中MTXPGs浓度、临床疗效及肝毒性的关系。3、研究RA患者MTXPGs浓度与疗效及肝毒性的相关性,探讨影响疗效及MTXPGs稳态浓度的因素。4、建立 MTXPGs 的群体药动学（population pharmacokinetics,PPK）模型,定量考察影响药动学参数的因素,为RA个体化用药提供参考。方法1、采用高效液相色谱-质谱联用（HPLC-MS/MS）法,分别测定全血游离MTX和总MTX,从而计算出红细胞中MTXPGs浓度。2、前瞻性收集2018年4月至2019年10月于厦门大学附属中山医院接受小剂量MTX治疗的RA患者,采用基因芯片法检测SLCO1B1基因,应用SPSS软件分析基因多态性与MTXPGs浓度、疗效及肝毒性的关系。3、通过非参数检验分析MTXPGs浓度与疗效及肝毒性的相关性,绘制受试者工作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲线以寻找 MTXPGs 的治疗窗;通过Logistic回归和多元线性回归分别探讨影响患者疗效及MTXPGs稳态浓度的因素。4、应用非线性混合效应模型（nonlinear mixed effects model,NONMEM）建立MTXPGs的PPK模型,考察患者SLCO1B1基因型及各项生理指标、合并用药对MTXPGs药动学参数的影响。结果1、全血MTX在1～300 ng·mL-1范围内具有良好的线性关系（r=0.999 4）,检测限（LOD）为0.5 ng·mL-1。准确度（RE）在±5%内,日内和日间精密度（RSD）分别低于7.96%和10.88%,提取回收率高于70%。2、共收集137例RA患者,等位基因G的频率为73.7%、等位基因C的频率为11.7%。SLCO1B1基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡检测。388A>G和521T>C突变组与野生组的MTXPGs浓度、疗效及肝毒性均无差异。3、128例RA患者的治疗有效率为73.4%,患者间MTXPGs浓度个体差异大,且MTXPGs浓度与疗效及肝毒性均相关;当MTXPGs浓度为25～38 ng·mL-1时,患者疗效好且肝毒性小。MTXPGs浓度、年龄、血红蛋白、血小板和碱性磷酸酶是疗效的影响因素。MTXPGs稳态浓度与年龄、剂量和红细胞计数相关。4、基于128例RA患者的269个MTXPGs浓度数据及相关临床信息,建立MTXPGs 的最终模型为:CL=2.08×（22/ALT）0.153×（RBC/4）1.17×e0.346（L·h-1）,V=673（L）。模型诊断图、自举法和正态预测分布误差表明此模型具有良好的有效性和稳定性,预测能力良好。结论1、本研究建立的间接检测MTXPGs浓度的HPLC-MS/MS法快速、灵敏,具有高专属性和重现性,适用于临床上RA患者的MTX治疗药物监测。2、发现SLCO1B1 388A>G和521T>C基因多态性与MTXPGs浓度、疗效及肝毒性均无相关性。3、MTXPGs浓度与疗效及肝毒性均存在相关性,摸索出治疗窗为25～38 ng·mL-1。MTXPGs浓度、年龄、血红蛋白、血小板和碱性磷酸酶为影响疗效的因素,而年龄、剂量与红细胞计数为影响MTXPGs稳态浓度的因素。4、首次建立了我国RA患者MTXPGs的PPK模型,该模型有效且稳定,预测能力良好,可为MTX个体化用药方案的制定提供依据。