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H9亚型禽流感病毒（Avian Influenza Virus,AIV）在我国流行范围广泛,家禽中的感染现象比较普遍。H9亚型AIV感染可导致母鸡产蛋量减少,与其它病原体共同感染可增加家禽的死亡率,造成严重的经济损失。传统的灭活疫苗对H9亚型AIV可提供临床保护,但不能完全清除体内的病毒,免疫鸡感染后仍能排毒。传统灭活疫苗免疫方式繁琐,需要较高的人力成本。随着我国养殖业规模化水平的提高,研制出操作简便、适合大规模免疫的新型疫苗,已成为未来家禽疫苗的研发趋势。为了研制出适应集约化养殖需要的新型、高效的H9亚型禽流感疫苗,本研究以能克服新城疫（Newcastle disease,ND）母源抗体干扰的嵌合新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）AI4-2FHN为载体,构建了一系列表达H9亚型AIV流行株HA基因的新型弱毒疫苗株。该新型疫苗株易于繁殖,能通过饮水、气雾方式免疫,免疫后可诱导鸡群体内产生有效的免疫应答,在临床免疫的过程中具有广泛的应用前景。1.表达H9亚型禽流感病毒的HA基因重组嵌合NDV的构建为开发新型的H9N2亚型AIV的活疫苗,本研究以嵌合NDV（AI4-2FHN株）基因组为骨架,在NDV基因组P、M基因之间插入不同修饰的H9N2AIV HA基因,构建出5个重组质粒。其中重组质粒pNDV/AI4-2FHN-292HA是在P和M基因之间插入一个完整的HA基因开放阅读框;重组质粒pNDV/AI4-2FHN-HAG是在P和M基因之间仅插入HA基因的胞外区;重组质粒pNDV/AI4-2FHN-HAF是将HA基因的胞外区和NDV的F基因的跨膜区、胞内区融合后插入到P和M基因之间;重组质粒pNDV/AI4-2FHN-HAMU和pNDV/AI4-2FHN-HAFU是在HA基因的两端分别添加NDV的M、F基因的上下游非编码区序列后插入到NDV的P和M基因之间。5个重组质粒分别与3个辅助质粒pCI-NP、pCI-P和pCI-L共转染入BSR细胞,成功拯救出5株重组病毒。RT-PCR测序结果显示5株重组NDV已经构建成功。生物学特性测定结果显示,5株重组病毒的HA效价为8-91og2、MDT>120h、ICPI值均为0,均符合典型的弱毒特征。2.重组嵌合NDV的遗传稳定性以及免疫效力评价将构建成功的 5 株重组病毒（AI4-2FHN-292HA、AI4-2FHN-HAMU、AI4-2FHN-HAFU、AI4-2FHN-HAG、AI4-2FHN-HAF）在鸡胚中连续传至第 10 代,第 2、5、8代重组病毒的生物学特性试验及第1、3、5、8代重组病毒的HA基因序列比对、Western blot试验和IFA试验结果均显示重组病毒在传代过程中遗传稳定性高,HA蛋白可表达稳定。重组病毒高剂量接种试验鸡后,试验鸡无任何临床症状,表明重组病毒对鸡具有很好的安全性。免疫保护效力试验结果显示:5株重组病毒免疫SPF鸡后均能有效诱导H9亚型AIV特异性的HI抗体,可显著减少H9亚型AIV攻毒后的排毒量。同时,为了评价重组病毒在商品鸡的免疫效果,将5株重组病毒分别免疫2周龄商品鸡,3周后加免H9亚型AIV灭活苗,试验结果显示加免后,5株重组病毒免疫组都能迅速产生针对H9亚型AIV的特异性抗体,其中重组病毒AI4-2FHN-HAG产生速度最快。重组弱毒疫苗加灭活苗的免疫方式能显著提高商品鸡群中H9亚型AIV的特异性抗体的产生速度,并能显著减少排毒量,为新型疫苗的免疫方式提供了一种新的思路。