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目的:通过比较不同中医证型冠心病患者血脂水平、血清外泌体microRNA(miRNA)表达差异,进一步研究冠心病痰浊血瘀证患者血清外泌体源性miR-451对单核巨噬细胞炎症因子表达的调控机制,探讨外泌体源性miR-451靶向调控单核巨噬细胞炎症因子表达介导冠心病痰浊血瘀证发病的分子机制。材料与方法:选取2018年1月至2018年2月辽宁中医药大学附属医院门诊及住院部就诊的冠心病痰浊血瘀证患者31人、冠心病非痰浊血瘀证患者33人,并选取体检的健康正常人26人进行对照,于清晨空腹采血后分离血清测定总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、载脂蛋白-A1(Apo-A1)、载脂蛋白-B(Apo-B)表达情况。由于脂质代谢异常引起的机体紊乱常由于炎症反应引发,因此选取3例冠心病痰浊血瘀证患者、3例健康正常人血清进行外泌体miRNAs测序,找出差异表达miRNAs,查阅文献并通过预测网站及分析软件确定miRNA及其对应炎症相关靶基因。通逆转录-实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术对冠心病痰浊血瘀证患者及健康正常人血清外泌体内miR-451及其对应炎症靶基因巨噬细胞移动抑制因子(MIF)和下游炎症因子基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的相对表达水平进行验证。建立巨噬细胞/外泌体共培养体系,外泌体粒径分析(NTA)检测外泌体粒径分布,蛋白质免疫印迹(WB)法检测外泌体标志蛋白,采用荧光活细胞成像技术观察巨噬细胞对外泌体的摄取。用RT-qPCR检测外泌体调控巨噬细胞MIF、MMP-9、TNF-α信使RNAs(mRNAs)的相对表达水平,从而验证血清外泌体miR-451和炎症因子的靶向调控关系。结果:1.冠心病痰浊血瘀证组与冠心病非痰浊血瘀证组及健康正常组相比,TC、TG、LDL-C水平显著增高(P<0.01),而HDL-C水平与健康正常组相比则呈下降趋势(P<0.01),Apo-A1及 Apo-B 无显著差异(P>0.05)。2.外泌体miRNA测序分析发现,冠心病痰浊血瘀证组血清外泌体内miRNA表达与健康正常组相比存在差异,miR-451,miR-6881-3p,miR-1292-5p,miR-6786-3p,miR-3661等在冠心病痰浊血瘀证中下降趋势明显(P<0.05),其中miR-451与冠心病痰浊血瘀证密切相关,主要通过胆固醇代谢(Cholesterol metabolism)、脂肪细胞中脂解的调节(Regulation of lipolysis in adipocytes)、细胞因子与细胞因子受体的相互作用(Cytokine-cytokine receptor interaction)、趋化因子信号通路(Chemokine signaling pathway)白细胞跨内皮迁移(Leukocytetransendothelial migration)等信号通路调节冠心病痰浊血瘀证。3.与健康正常组相比,冠心病痰浊血瘀证组血清外泌体miR-451表达量明显降低(P<0.05),而巨噬细胞炎症相关靶基因MIF、TNF-α、MMP-9 mRNAs表达量明显增高(P<0.05)。4.巨噬细胞分别与健康正常组或冠心病痰浊血瘀证组血清外泌体共培养,结果显示与健康正常组相比,冠心病痰浊血瘀证组血清外泌体可升高巨噬细胞内MIF、MMP-9、TNF-α mRNAs的表达水平(P<0.05),验证了miR-451对炎症因子MIF、MMP-9、TNF-α的调控关系。结论:1.血清TC、TG、LDL-C、HDL-C水平在一定程度上对诊断冠心病痰浊血瘀证有一定提示作用,且与动脉粥样硬化进程中炎症反应密切相关。2.冠心病痰浊血瘀证组血清外泌体miR-451的表达降低,不能有效抑制巨噬细胞炎症因子MIF、MMP-9、TNF-α的释放,从而促进冠心病痰浊血瘀证的发展。