禽呼肠孤病毒(ARV)是禽类重要的病原之一,ARV感染可引起鸡病毒性关节炎、慢性呼吸道疾病和吸收障碍综合征,给养禽业带来巨大的经济损失。 ARV S1基因编码的σ C蛋白为326个氨基酸,ARV S3基因编码的σ B蛋白为368个氨基酸,这两个蛋白都可以引起宿主细胞融合,在病毒的致病性上起着重要的作用;它们都携带有特异性中和抗原位点,与中和抗体产生有关。 通过一步法RT-PCR进行扩增,获得了σ C和σ B基因。经克隆和序列测定,用分子生物学软件对其cDNA序列进行分析,基于限制性核酸内切酶位点分析结果,设计了表达引物,并将克隆的σ C和σ B基因插入到大肠杆菌表达载体pGEX-4T-1中,转化大肠杆菌BL21,经PCR和酶切鉴定结果表明,目的基因正确插入到重组表达载体中,成功构建了表达载体pGEX-ARV σ C和pGEX-ARV σ B。 通过IFFG诱导表达、蛋白SDS-PAGE分析表明,重组表达蛋白以包涵体的形式存在于大肠杆菌中,融合蛋白σ C的分子量为60KDa,融合蛋白σ B的分子量为64KDa,与预期相符。Western—blot分析表明σ C和σ B蛋白均与ARV抗血清产生特异性反应。进一步用ELISA方法对纯化的融合蛋白σ C和σ B进行活性鉴定,结果表明σ C和σ B蛋白均有较好的反应活性。 σ C和σ B蛋白的表达为其免疫原性及蛋白功能研究奠定了一定的基础。