MP对大鼠急性脊髓损伤后Caspase-3的表达的影响

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目的:通过独创的环扎法构建大鼠急性脊髓损伤模型并在早期使用甲基强的松龙,在不同的时间段观测大鼠运动状态、病理表现以及观测Caspase-3的表达情况,探讨了SCI的早期药物治疗策略,并为临床工作提供有益的帮助。方法:本实验的成功建立在前期工作中构建的大鼠环扎法,通过大量的动物实验可以证实此方法具有稳定性、可重复性,且方法较为简单。具体方法为随机选取115只SD雄性大鼠,大鼠年龄大约为13周左右,随机分为三组:A组(空白对照组)手术行椎板减压术,并不作环扎处理;B组(对照组):手术行椎板减压术+术后6h行脊髓环扎术;C组(实验组):手术行椎板减压术+术后6h行脊髓环扎术,并在3h后静脉注射MP。环扎法致大鼠脊髓损伤模型具体构建方法为:术前首先使用移动式C臂机对大鼠腰椎部位进行定位拍片,选取大鼠T1011部位,在准备手术的区域进行备皮,并用碘伏消毒常规铺巾操作。洗手消毒后沿着大鼠背部正中线在标定区域选取一长约3cm的手术切口,并逐层切开皮肤,剥离皮下筋膜,并沿着椎体部位两旁纵行拨开肌肉组织,通过微创手术器械逐步咬除椎板暴露硬脊膜囊,完全暴露后使用手术可吸收线通过手术微型缝针穿过大鼠脊髓,测出脊髓周径C1,然后通过计算公式,即C2=C1×0.71/2算出周径的70%的C2值,这个C2值即使实验所需环扎致脊髓压迫所需的结扎程度,在模型完成后的1天、3天、7天、14天、21天分别对大鼠进行运动功能检测,包括大鼠斜板法评分、BBB评分,评测后处死大鼠,取出环扎的脊髓组织做病理切片进行HE染色、免疫组化、原位末端脱氧核糖核酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸(d UTP)标记法(TUNEL法)检查,综合数据后对数据进行统计学分析,得出相应的结论。结果:实验结果显示A组空白对照组中,各天数组中斜板评分、BBB评分、HE染色及免疫组化、Caspase-3阳性细胞数目等未见明显异常的表现。而相比与A组,在B组实验组中斜板评分及BBB评分明显低于A组,而C组实验组虽然评分低于空白对照组,但是高于B组。而Caspase-3阳性细胞数目中B、C两组表达数目高于A组对照组,在B、C两组之间相比,表达高峰均出现于3天左右,从7天开始都逐渐下降,但是B组阳性细胞数目在各组间均高于C组。各数据均有统计学意义(P<0.05)。结论:1.独创的环扎法致大鼠脊髓损伤模型简单有效,具有可重复性,造成脊髓压迫状态并且能静态保持,影响因素较少,可以为同类研究提供一种可选方法;2急性脊髓损伤造成的伤害是一个持续渐进的过程,前期损伤主要在于原发伤害对于脊髓的压迫及损伤,后期则主要为细胞凋亡过程,半胱氨酸蛋白酶也被称为死亡蛋白酶是一种被认为在细胞凋亡过程中最为重要的蛋白类,而Caspase-3是其中最为重要的一种,是多种凋亡途径中共同的下游效应部分,也是发生凋亡过程的酶联反应必经之路;3通过动物实验观察可见,在发生SCI后早期使用MP治疗的大鼠,在运动功能恢复及病理状态的恢复都有不同程度促进性影响,为临床使用MP治疗提供了理论证据。
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