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在正常生理环境下,关节滑液的pH维持在正常水平7.4左右,而在关节炎的发生发展过程中,由于病理组织的炎症反应,导致局部的无氧糖酵解,产生乳酸和ATP水解的H+的积聚,可以引起病理组织局部pH值的下降至6.0甚至更低。酸敏感离子通道(acid-sensing ion channels, ASICs)是一类由胞外酸化后被H+激活的阳离子通道,开放的通道对Na+、Ca2+具有可通透性,进而引起细胞一系列生理病理变化。本课题组前期实验结果表明,ASICla高表达于佐剂性关节炎大鼠的膝关节软骨细胞并参与软骨破坏和基质代谢的过程,但对于其表达升高的机制尚不清楚。充分证据表明,炎症环境下神经生长因子(Never growth factor, NGF)对神经组织的ASIC1a表达有明显的调控作用。本实验观察到,在关节炎尤其是类风湿性关节炎的发病过程中伴随着血浆和滑液中NGF的升高,那么这是否与软骨组织ASIC1a表达升高有关系呢?为此,本研究选用大鼠软骨细胞为研究对象,采用胞外酸化刺激软骨细胞模型,探讨NGF在酸性环境下对软骨细胞ASIC1a的调控作用及其可能的分子机制。目的：观察在酸性条件下神经生长因子对大鼠关节软骨细胞酸敏感离子通道的表达和部分基质代谢的影响。内容：1.酸性环境下,软骨细胞NGF受体的表达情况以及NGF刺激对软骨细胞ASIC1a表达的影响；2. ERK1/2信号通路在NGF调节ASICla表达过程中所起的作用；3.探讨NGF在酸性环境下对软骨细胞HYP/MMP-9基质代谢的影响方法：1.酸性环境下(0、8、16、24h),观察NGF受体1k-A的表达；酸化16h后NGF (0、2、10、50ng/ml)处理8h,通过RT-PCR和Western-blot法检测ASIC la的表达：2.酸化16h后10ng/mlNGF(0、0.5h、1h、2h、4h、8h),Western-Blot法观察ERK1/2, c-fos蛋白活化的时效关系,阻断RK1/2 (PD98059 30μM)后观察c-fos蛋白和ASICla的表达；3.选择软骨细胞为实验对象,酸化16h后,设对照组、NGF(2ng/mL)、 NGF(10ng/mL)、NGF(50ng/mL)、anti-NGF antibody(1:1000)组、 NGF+ASIC1asiRNA沉默组,上清液收集：NGF处理24h后,换正常培养基,收集72h后上清；蛋白收集：NGF处理24h后收集蛋白。ELISA检测软骨细胞培养液中MMP-9的水平,Western-Blot法检测MMP-9的蛋白表达水平,免疫组化法检测Ⅱ型胶原的表达,氯胺T法检测培养上清中HYP的水平。结果：1.在酸性环境下NGF的高亲和力受体Trk-A表达比正常环境高出3倍,且对于酸化条件呈一定范围内的时间依赖性,在16-24h趋于稳定,在24h时表达量达到最大水平；ASIC1a的表达随着NGF的浓度升高而升高,1Ong/ml时趋于稳定；2. ERK1/2、c-fos蛋白随着NGF加入的时间活化增强,4h达到最大水平,阻断了ERK1/2之后,c-fos和ASIC1a蛋白表达下降；3.在酸性环境下,NGF可以减少软骨细胞Ⅱ型胶原的表达,降低MMP-9的表达,anti-NGF antibody可以有效抑制NGF的作用,基因水平阻断ASICla表达后,可抑制MMP-9和Ⅱ型胶原的降低。结论：1.在酸性环境下,NGF参与了大鼠关节软骨细胞ASIC1a表达的调控；2.ERK1/2信号通路的活化参与了NGF调控ASIC1a表达的过程；3.酸性环境下NGF参与调控大鼠关节软骨细胞的基质代谢,其机制与影响ASIC1a的表达有关。