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第一部分富血小板血浆与骨髓浓缩物的制备与鉴定【目的】分别制备山羊自体富血小板血浆（platelet-rich plasma,PRP）与骨髓浓缩物（bone marrow concentrate,BMC）,并比较PRP与BMC中血小板、单核细胞含量、生长因子水平和干细胞（mesenchymal stem cell,MSCs）富集程度。【材料与方法】1.PRP的制备全麻状态下,分别从波尔山羊耳缘静脉或前肢头静脉采集40毫升外周血,抗凝处理后,分别进行两次离心（350g×10min、450g×15min）,第一次离心后抽吸去除底层浓缩红细胞成分,第二次离心后抽吸底层5ml淡红色液体即为PRP。2.BMC的制备全麻状态下,分别从波尔山羊两侧髂后上棘处进行骨髓穿刺,采集40毫升骨髓,抗凝处理后,分别进行两次离心（350g×10min、450g×15min）,第一次离心后抽吸去除底层浓缩血细胞成分,第二次离心后抽吸底层5ml深红色液体即为BMC。3.检测指标分别将等体积外周血、PRP与骨髓、BMC离心处理（400g×15分钟）,观察其物理性状与细胞层次分布;利用全自动血细胞分析仪检测上述样品中血小板和单核细胞浓度;利用山羊生长因子Elisa试剂盒检测样品中TGF-β1与IGF-1的水平;利用流式细胞仪分别检测样品中CD34（+）和CD44（+）细胞的比率。【结果】1.大体观:经离心处理后,PRP和BMC中血细胞层与血浆层分界处分别可见明显的乳白色和絮状物沉积,其厚度较浓缩处理前明显增加。2.细胞分类计数:PRP中血小板浓度（1330.1×10~3/μL）比外周血（461.7×10~3/μL）升高2.9倍（P<0.05）,BMC中血小板浓度（1190.3×10~3/μL）比骨髓（663.2×10~3/μL）升高1.8倍（P<0.05）;PRP与BMC中血小板浓度差异无统计学意义（P>0.05）。BMC中单核细胞浓度（2.117×10~3/μL）分别比骨髓（0.378×10~3/μL）和PRP（0.202×10~3/μL）升高5.6倍与10.5倍（P均<0.05）;PRP与外周血中单核细胞浓度差异无统计学意义（P>0.05）。3.生长因子水平:PRP中TGF-β1水平（7.308 ng/m L）比外周血（2.232 ng/m L）升高3.3倍（P<0.05）,BMC中TGF-β1水平（14.621 ng/m L）)比骨髓（1.912 ng/m L）升高7.7倍（P<0.05）,BMC中TGF-β1水平较PRP升高2.1倍（P<0.05）。BMC中IGF-1水平（110.3 ng/m L）比BM（30.28 ng/m L）和PRP（35.14ng/m L）分别上升3.6倍和3.1倍（P<0.05）,PRP与WB中IGF-1水平差异无统计学意义（P>0.05）。4.流式细胞检测:BM中CD34（+）细胞比率为0.85%,CD44（+）细胞比率为0;BMC中CD34（+）和CD44（+）细胞比率分别为0.9%和1.49%。【结论】利用离心试管套装,经两步离心法制备的PRP和BMC,其有效细胞成分和部分生长因子水平均比浓缩前明显升高,BMC中干细胞成分得到富集。第二部分富血小板血浆与骨髓浓缩物治疗早期骨关节炎的动物实验研究【目的】在山羊OA模型中,分别注射自体富血小板血浆（platelet-rich plasma,PRP）和骨髓浓缩物（bone marrow concentrate,BMC）,评估PRP和BMC对OA退变软骨的保护与修复作用,比较两者间的差异,并初步探索其作用机制。【材料与方法】1.实验分组以25只成年雄性波尔山羊的右侧后肢膝关节作为研究对象,共计25例膝关节,其中1只作为造模观察动物单独编号,其余24只按照随机数字法将其随机分为如下四组:（1）对照组:单纯饲养,不干预;（2）生理盐水组:造模后关节腔注射生理盐水;（3）PRP组:造模后关节腔注射自体PRP;（4）BMC组:造模后关节腔注射自体BMC。2.OA模型的构建采用手术切除前交叉韧带和内侧半月板的方法构建OA模型。术后第5周评估造模效果。3.实验流程造模后第6周,全麻状态下,分别采集20ml外周血与骨髓,利用离心试管套装,经两步离心法制备PRP或BMC。按实验分组分别向造模关节腔内注入无菌NS、PRP或BMC 2ml。每四周注射一次,共三次。末次注射后6周处死动物并取材、检测。3检测指标动物处死后,收集关节液,观察关节液大体性状;关节液离心后收集上清,利用ELISA试剂盒检测其中IL-1β、IL-6、PGE2和TNF-α等因子水平;对各组关节滑膜组织进行H&E染色,对软骨-骨组织块分别进行H&E、翻红素O-固绿及2型胶原免疫组化染色,利用OARSI（Osteoarthritis Research Society International）和改良Mankin评分标准分别对关节软骨磨损进行大体和病理评分。【结果】关节液大体观:对照组关节液呈微黄色,澄清透亮;生理盐水组关节液呈血性,可见较多絮状物;PRP组和BMC组关节液呈淡红色,絮状物较NS组显著减少。关节液中炎性因子水平:与对照组相比,生理盐水、PRP、BMC三组关节液中IL-1β、IL-6、TNF-α和PGE2水平均呈升高趋势（P<0.05）;与生理盐水组相比,PRP组中IL-6和PGE2水平呈下降趋势（P<0.05）,BMC组中IL-1β、IL-6、TNF-α和PGE2水平均呈下降趋势（P<0.05）;BMC组中IL-1β水平较PRP组更低（P<0.05）。组织病理学评估:与对照组相比,和生理盐水组可见滑膜组织炎性反应显著,组织增生、毛细血管充血、扩张及炎性细胞浸润;关节负重面广泛、全层软骨剥脱,软骨下骨外露伴明显骨赘形成,软骨结构消失,潮线结构仅残余部分纤维样组织。PRP组滑膜组织炎性反应减轻,软骨表层和中层结构破坏,深层软骨结构和ECM保留较好,潮线结构基本完整,关节边缘中度骨赘形成。BMC滑膜组织炎性反应明显减轻,软骨磨损限于表层,中层和深层细胞结构与ECM保留完好,潮线结构完整,无明显骨赘形成。OARSI与改良Markin评分:NS、PRP与BMC三组软骨损伤评分呈下降趋势（P<0.05）。【结论】PRP和BMC能够有效抑制滑膜组织的炎症反应,降低关节液中炎性因子水平,促进软骨细胞的修复与再生,延缓了关节软骨退变的病理进程。两者相比,BMC较PRP效果更加满意。