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目的: 肝细胞癌是当今世界第三位导致癌症相关死亡的恶性肿瘤,肝细胞癌患者预后极差,多数患者于诊断后1年内死亡。最近有研究表明AGBL2异常表达参与多种人体肿瘤进展,但AGBL2在肝细胞癌中的表达状态及其临床病理意义仍不清楚。 方法: Western blot检测肝细胞癌细胞株及肝细胞癌组织中AGBL2的表达水平。免疫组化检测212例肝细胞癌组织芯片中AGBL2的表达状态并分析其临床病理学意义。体外构建AGBL2稳定过表达细胞株及稳定敲低表达细胞株,利用体外CCK8实验、流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡、Transwell等检测AGBL2异常表达对细胞增殖、迁移能力的影响。同时,通过裸鼠皮下成瘤检测AGBL2敲低表达对癌细胞成瘤能力的影响。进一步通过Western blot和免疫荧光等检测AGBL2异常表达对α-tubulin去酪氨酸化、自噬标记蛋白LC3A/B等的调控,并利用免疫共沉淀、激光共聚焦检测去酪氨酸化α-tubulin与LC3A/B的相互作用关系。最后,通过人自噬RT-PCR84基因芯片筛选介导AGBL2诱导性自噬的相关靶基因,利用RNA干扰验证靶基因并明确AGBL2诱导性自噬对癌细胞的调控作用。最后,在肝细胞癌组织芯片中通过免疫组化分析AGBL2与IRGM、LC3A/B,IRGM与LC3A/B相关性。 结果: Western blot显示AGBL2在肝细胞癌细胞系和肿瘤组织中过表达,而在正常永生化的MIHA细胞和配对的癌旁组织中表达较低。73/212(34.4%)的肝细胞癌组织中检测到AGBL2高表达。AGBL2高表达与肿瘤体积、肿瘤数量及肿瘤的临床分期呈正相关(p<0.05)。单变量生存分析显示AGBL2低表达的患者存活率明显高于高表达的患者(p<0.001),多变量Cox回归分析表明AGBL2是肝细胞癌患者预后不良的分子标记物。AGBL2的稳定的过表达增强肝细胞癌细胞活力,促进癌细胞周期进展,并抑制癌细胞凋亡。AGBL2敲低表达降低肝细胞癌细胞活力,抑制癌细胞周期进展,并促进癌细胞凋亡。体内裸鼠皮下成瘤实验显示AGBL2敲低表达显著减弱癌细胞成瘤能力。此外,AGBL2过表达促进α-tubulin去酪氨酸化,并增强自噬相关蛋白LC3A/B、ATG5、ATG12和ATG3蛋白表达水平。P62蛋白水平检测及LC3A/B与LAMP1共定位分析显示AGBL2诱导性自噬功能完整。并且,LC3A/B与去酪氨酸化α-tubulin间有相互作用,提示AGBL2通过促进α-tubulin去酪氨酸化增强自噬。自噬相关基因芯片筛选结果显示IRGM参与介导AGBL2诱导性自噬。下调IRGM蛋白表达可显著降低LC3A/B、ATG5、ATG12和ATG3蛋白表达水平,并抑制癌细胞存活、促进癌细胞凋亡。免疫组化结果显示AGBL2与IRGM、LC3A/B,IRGM与LC3A/B呈正相关。 结论: 本研究证实AGBL2在肝细胞癌中高表达与肿瘤恶性表型密切相关,是肝细胞癌患者预后不良的分子标记物。AGBL2过表达促进肝细胞癌细胞存活和增殖。AGBL2通过增强自噬促进癌细胞存活。IRGM参与介导AGBL2诱导性自噬。