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猪流感(Swine influenza, SI)是由猪流感病毒(Swine influenza virus, SIV)引起的一种高度接触性传染的猪呼吸道疾病。猪同时具有禽流感病毒和人流感病毒的唾液酸受体，常被认为是产生新型重配病毒的“混合器”。SIV在猪群中以H1N1、H1N2和H3N2为主要流行亚型，因此，开展对SI监测、遗传演化分析及诊断方法的建立，对SI的防控具有重要意义。为了解我国猪群中流感病毒的感染与流行情况，我们于2011-2012年期间先后从不同省市重点地区屠宰场、规模化猪场和个体养殖户的采集的13044份猪血清样品，本研究用猪源经典H1N1(CS)、类禽H1N1(EA)、甲型H1N1[2009A(H1N1)]、H3N2、以及禽源H5N1、H9N2亚型流感病毒标准抗原，用血凝抑制(HI)试验方法进行了检测。检测结果显示，2011-2012年我国猪血清中类禽H1N1抗体平均阳性率比其他亚型高，且分别为42.24%和45.89%，H1N1血清抗体平均滴度(GMT)同比其他亚型高。结果表明2011-2012年我国猪群中H1N1亚型SIV感染较为普遍。本研究对3000份猪鼻拭子样品进行病毒分离。样品经常规处理后，接种10日龄的非免疫鸡胚进行SIV的分离，通过HI和逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)鉴定共分离到4株H1N1亚型SIV。对4株病毒的各基因片段进行的遗传演化分析结果表明，SW/GX/133/11、SW/GX/547/112株SIV与2009年大规模感染人的甲型H1N1流感病毒的进化关系更为接近，可能是由2009年人群中流行的甲型H1N1流感病毒跨种间传入猪群，在猪体内进化而来的；SW/HN/232/11、SW/HLJ/24/112株SIV属于类禽型H1N1SIV，从进化关系上可以看出，它们均可能源自类禽型SIV。该研究结果进一步阐明了当前我国猪群中SIV的遗传特性。为建立快速检测甲型H1N1流感病毒的TaqMan荧光定量PCR方法，本研究根据甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)基因保守序列，设计并合成了特异性引物和TaqMan MGB探针，利用实时荧光定量PCR技术检测甲型H1N1流感病毒。使用含有选定检测序列的重组质粒pMD-H1-HA标准品绘制标准曲线，其相关系数为0.999，敏感性可达50TCID50。本研究中，甲型H1N1流感病毒TaqMan荧光定量PCR方法与经典H1N1、类禽H1N1、类人H1N1、H1N2、H3N2、H5N1和H9N2无交叉反应。结果证明，该方法可在人类和动物间有效地检测甲型H1N1流感病毒。