DNA复制过程中,校正功能缺失的聚合酶a起始冈崎片段的合成。然而,这种聚合酶合成DNA的准确率比其他DNA复制中的聚合酶6或聚合酶ε要低很多。聚合酶a错配合成需由依赖MSH2的错配修复途径来纠正。通过研究,我们发现哺乳细胞中的FEN1也参与这种修复途径。根据实验结果,MSH2与FEN1相互作用并促进其核酸酶活性去除DNA底物的5’端错义配对,这个过程我们叫做a片段错配纠正(α-segment error editing, AEE)。FEN1内切酶活性和外切酶活性突变体蛋白在体外不能完成a片段错配纠正过程。突变体小鼠具有很强的突变表型,增加了细胞转化及肿瘤发生的几率。通过以上研究我们发现了一种FEN1/MutSa复合体参与的新的聚合酶a合成错配修复机制。FEN1作为一个核酸酶,其活性及位置如果不能得到精密控制,携带有遗传信息的DNA可能会受到任意攻击,细胞周期也会发生紊乱。因此,FEN1在剪切完RNA引物并从PCNA上解离后的去向问题也值得深思。通过前期实验结果,发现FEN1蛋白表达量随着细胞周期阶段发生变化,在S期之后的G2/M期发生泛素化介导的降解(Ubiqutin-proteasome degradation pathway)在这个课题中,我主要利用免疫共沉淀技术及质谱检测方法发现了介导了FEN1降解的泛素化酶激活酶E1:UBE1,结合酶E2:UBE2M以及连接酶E3:PRP19。根据FEN1在细胞周期中程序性翻译后修饰的模型,甲基化的FEN1与PCNA分离时应首先进行去甲基化反应。通过研究,发现FEN 1确实存在去甲基化情况,为了寻找这个FEN1的精氨酸去甲基化酶,我们在FEN1去甲基化过程中利用免疫共沉淀技术发现了潜在的精氨酸去甲基化酶JMJDIB。通过进一步地体外生化活性检测,基本确定JMJD1B蛋白具有特异催化精氨酸甲基化FEN1去甲基化的功能。这意味着我们首次发现了可以对非组蛋白精氨酸甲基化底物去甲基化的酶。