3D胶原支架微环境对树突状细胞发育和生物学功能影响的研究

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细胞微环境是由可溶性因子、细胞与细胞及细胞与基质构成的一个复杂的系统,其在细胞命运决定、细胞存活及功能调控方面扮演着十分重要的作用。树突状细胞(Dendritic cells,DCs)是机体内功能最为强大的抗原提呈细胞,可高效地摄取、加工、处理和提呈抗原,在启动免疫应答、调控、维持免疫稳态中起着至关重要的作用。迄今为止,人们对树突状细胞的发育、生物学功能进行了深入而广泛的研究。然而,微环境对树突状细胞的发育分化、生物学功能方面的影响不甚清楚。本研究以3D胶原支架微环境对树突状细胞的发育及生物学功能的影响进行了研究。首先,我们分析了培养于3D胶原支架中由骨髓细胞经粒细胞巨噬细胞-集落刺激因子(GM-CSF)诱导分化而来DC的形态学特点,发现3D胶原支架培养的DC呈多形型,伪足粗短且突起较少,而2D培养的DCs呈日冕状或放射状,伪足细长且突起较多。表型分析发现3D较2D培养的DCs低表达CD11c、CD40、CD80、CD83、CD86和MHCⅡ类分子,说明3D胶原支架培养的DCs是一种在形态学和表型上与2D培养DCs不同的亚类,基于其表型特点而命名为CD11b+MHC-IIlow DCs。其次,抗原摄取能力分析发现,CD11b+MHC-IIlow吞噬能力较弱。混合淋巴细胞分析发现,CD11b+MHC-Ⅱlow具有抑制T细胞体外增殖的能力且培养上清分泌低水平的淋巴细胞激活相关因子IL-2和IFN-γ。细胞因子表达谱发现,CD11b+MHC-Ⅱlow高表达IL-10,低表达IL-12p70和TNF-α。迟发型超敏试验分析发现,CD11b+MHC-Ⅱlow可减轻足垫肿胀程度,且其外周血和脾脏单核细胞分泌高水平的IL-10和TGF-β1。最后,基因芯片转录组分析发现,3D胶原支架培养DC高表达非成熟DCs相关基因CCL3、CCL4、CCR1、CCR3和CCR5,而低表达与抗原摄取、加工和提呈相关的基因LAMP3、CD40、CD80、CD83、CD86。此外,还高表达与免疫抑制相关的基因IL-10、TGF-β1、SOCS3和CCL24。Transwell试验分析发现,培养体系中的可溶性因子和细胞与胶原支架材料的接触导致了该细胞的产生。抗体中和试验分析发现,IL-10和TGF-β1中和抗体可减少该细胞的产生比例。细胞凋亡分析发现,3D胶原支架培养DC出现较高比例的细胞凋亡且高表达凋亡相关基因及免疫抑制基因。总之,本研究结果表明,3D胶原支架培养产生的CD11b+MHC-Ⅱlow是一群新的调节性树突状细胞(DCregs),在体内外具有负向调控免疫的功能。3D胶原支架在体外为骨髓细胞向特定DCs细胞的分化提供了适合的微环境,这也为DCregs的体外制备提供了简易的制备方法并为自身免疫相关疾病的治疗提供了新的策略。
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