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Syncytin 是人类内源性逆转录病毒 W1(human endogenous retroviruses W1,HERV W1)的一种囊膜蛋白,孕早期定位于绒毛膜滋养层,在胎儿发育过程中起重要作用,其异常表达可导致宫内发育迟缓、病理性胚胎、肿瘤和多发性硬化症等,且Syncytin的异常表达与生殖系统恶性肿瘤、淋巴细胞瘤、黑色素瘤及先兆性子痫,溶血-肝转氨酶升高-血小板减少综合征(hemoysis,elvated liver enzymes and low platelets,HELLP)等具有相关性。本研究的主要工作是寻找与Syncytin具有相互作用的蛋白,并对互作蛋白的功能进行探究,主要内容包含以下几个方面:1、Syncytin融合功能的研究在Syncytin的膜融合功能研究中,将Syncytin含标签的真核表达载体转入本身表达Syncytin的Hela细胞中。通过RT-qPCR、双荧光染色法及Western Blot法检测过表达Syncytin对Hela细胞内源性Syncytin的影响。与阴性组转染组相比,Hela细胞中Syncytin的mRNA水平上调明显,且细胞中有较明显的促细胞成团,聚集现象。但是,转染不同时间后,Hela细胞中的Syncytin蛋白水平上升较慢,直至第十天才出现显著性上调。2、细菌和细胞双水平筛选Syncytin互作蛋白为了对Syncytin蛋白功能进一步探究,我们通过细菌双杂交技术来筛选互作蛋白。构建筛选所需的诱饵质粒pKT25-Syncytin,无细胞毒性且无自激活作用;使用文库载体pUT18C构建人全血基因组文库。共同转入报告菌DHM1中,进行观察和统计。通过对蓝色单菌落进一步的文库质粒纯化、PCR检测序列插入情况、送样进行测序分析。发现终止子前的93bp碱基编码的31个氨基酸序列,我们将基因序列命名为SJ-1,氨基酸编码的蛋白也命名为SJ-1。在细胞水平的互作探究中,我们使用免疫沉淀-质谱(inmunoprecipitation-mass spectra,IP-MS)联用的方法来筛选互作蛋白。Western blot检测了三种白血病细胞系及宫颈癌细胞系中Syncytin的表达情况。THP-1、U937及Hela细胞有不同水平表达Syncytin。通过IP,我们检测到了一些能与Syncytin蛋白特异性结合的细胞内蛋白。经检测,可用于MS检测。MS检测IP组鉴定到400条蛋白,IgG组鉴定到355条蛋白,IP组与IgG组取交集,IP组鉴定到258条独有的蛋白。3、细胞水平验证互作蛋白SJ-1对内源性Syncytin的影响为了验证SJ-1与Syncytin是否有相互作用,我们分别构建了 SJ-1和Syncytin两种含不同标签的真核表达载体,转染细胞后,通过Co-IP及WB进行验证。Input组均显出预期大小的蛋白条带,IP为HA,可以显出Flag标签沉淀的Syncytin,IP为Flag,可以显出HA标签沉淀的SJ-1。通过RT-qPCR、双荧光染色法及Western Blot法检测过表达的SJ-1蛋白对Hela细胞内源性Syncytin的影响。发现转染SJ-1九天后,内源性的Syncytin出现下降。另外,RT-qPCR检测的mRNA水平也有显著性下调。双荧光染色结果揭示,SJ-1转染组的细胞融合情况显著低于Syncytin转染组,与对照组的细胞融合情况无明显差异。本研究通过细胞和细菌水平的筛选与鉴定,发现了可以下调内源性Synctin表达的氨基酸短肽SJ-1。通过IP-MS联用,鉴定到258条独有的互作蛋白。