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目的:通过构建XIAP沉默的人胃癌SGC-7901和HCG-27细胞,探讨沉默XIAP对DADS抑制SGC-7901与HCG-27细胞增殖、迁移及侵袭的能力影响以及其分子机制。方法:构建沉默XIAP的载体,通过脂质体把质粒转染SGC-7901细胞和HCG-27细胞,建立稳定沉默XIAP的SGC-7901和HCG-27细胞系,运用q RT-PCR、Western-bolt技术验证XIAP及相关蛋白的表达,通过MTT、划痕、小室迁移和侵袭实验观察DADS及沉默XIAP对人胃癌SGC-7901细胞和HCG-27细胞增殖、迁移和迁移能力,裸鼠成瘤实验来检测体内成瘤能力的影响,细胞免疫荧光、q RT-PCT、Western-blot实验检测DADS处理后EGFR、PAK1、XIAP、E-cadherin表达情况;免疫组织化学检测各组移植瘤E-cadherin、vimentien、Ki67、CD34表达。结果:1.稳定沉默XIAP的SGC-7901和HCG-27细胞的构建。构建pc DNA6.2-GW/Em GFP-mi XIAP载体,测序显示构建成功,分别将4个沉默XIAP的载体和空载体转染SGC-7901和HCG-27细胞后,运用荧光显微镜观察转染细胞,视野内可见大量带绿色荧光细胞,行q RT-PCR和Western blot检测XIAP表达情况,可以看到序列3效果最佳,加入blasticidin S HCL加压筛选14天,形成荧光圆形细胞团后挑选至六孔板继续扩大培养,细胞保种备用。2.沉默XIAP及DADS处理后,SGC-7901和HCG-27细胞增殖、侵袭以及迁移能力的变化将各组细胞行MTT实验,结果显示XIAP沉默的SGC-7901和HCG-27细胞增殖能力较未转染细胞明显减弱(P<0.05),说明沉默XIAP可抑制胃癌细胞增殖,DADS处理后可明显减弱SGC-7901和HCG-27细胞对应未处理组细胞的增殖能力(P<0.05),XIAP沉默细胞经DADS处理前后增殖能力差异显著(P<0.05),说明沉默XIAP后能增强DADS对SGC7901和HCG27增殖的抑制效果。SGC-7901细胞行小室迁移及侵袭、HCG-27细胞行划痕和transwell侵袭实验,结果显示转染XIAP的SGC-7901和HCG-27细胞较对照组、细胞DADS(+)组较DADS(—)、干扰XIAP+DADS较DADS组侵袭、迁移能力显著下降(P<0.05),沉默XIAP后DADS抑制SGC-7901和HCG-27细胞迁移、侵袭的作用加强。3.DADS和沉默XIAP后对SGC-7901和HCG-27细胞EGFR、PAK1、E-cadherin蛋白表达的影响SGC-7901和HCG-27细胞行细胞免疫荧光显示,DADS处理组较对应未处理组XIAP表达下降,沉默XIAP后XIAP表达明显下调;Western和QRT-PCR结果显示,经DADS处理与对应未处理组细胞EGFR、PAK1、XIAP表达下调(P<0.05),E-cadherin表达上调(P<0.05),而沉默XIAP组较对照组相比EGFR、PAK1表达未下调(P>0.05),而E-cadherin表达上调(P<0.05)。将SGC-7901各组细胞注射至裸鼠腋下,致瘤后测得瘤体体积、重量;数据说明DADS处理组与较对应未处理组成瘤能力明显下降(P<0.05),XIAP沉默+DADS较DADS组对比,成瘤能力显著下降(P<0.05),说明沉默XIAP可增强DADS抑制SGC-7901细胞成瘤能力。4.DADS与沉默XIAP对SGC-7901细胞裸鼠成瘤能力的影响结论:1.沉默XIAP和DADS可抑制人胃癌SGC-7901和HCG-27细胞增殖与迁移侵袭。2.沉默XIAP能增强DADS抑制SGC-7901和HCG-27细胞增殖与迁移侵袭效果。3.DADS下调XIAP通过EGFR/PAK1通路抑制SGC-7901和HCG-27细胞增殖与迁移侵袭及SGC-7901细胞成瘤能力。