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龙葵(Solanum nigrum L.)为茄科茄属一至多年生野生草本双子叶植物,全草皆可入药。现代药理研究表明以澳洲茄边碱和澳洲茄碱为代表的甾体生物碱是龙葵抗肿瘤的主要有效成分,能够抑制多种肿瘤细胞的增殖。近年来,野生龙葵难以满足人们在医药和农业上的需求,现已开展人工种植,但龙葵种子较小,且种子萌发时间不一致、出苗不齐、部分种子存在休眠现象等问题。严重限制了龙葵的人工种植规模化发展,降低了其生产效益。本实验从种子出发,以期为龙葵愈伤组织的建立和大规模人工种植提供更加优化的方式方法。本研究通过对龙葵种子水培浸种处理,对不同萌发阶段种子可溶性糖、可溶性蛋白、淀粉及内源激素吲哚乙酸(IAA)、赤霉素(GA3)、玉米素(ZT)和脱落酸(ABA)含量之间的变化进行分析。在此基础上测定了龙葵种子的千粒质量、净度、含水量及吸水率,分别采用不同的外源激素和浸种温度处理,观测种子的发芽势、发芽率、发芽指数、活力指数及幼苗根长株高的变化。盐胁迫下的龙葵种子及幼苗经过不同质量浓度的外源5-氨基乙酰丙酸(ALA)处理后,对龙葵种子发芽势、发芽率、活力指数、发芽指数进行测定,并对龙葵幼苗叶片光合色素含量、丙二醛(MDA)含量、原生质膜透性、可溶性蛋白含量、游离脯氨酸含量、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性进行测定。本研究利用组织培养技术,筛选龙葵组织培养的最佳外植体和最适培养基类别,运用响应面优化龙葵愈伤组织诱导培养基。测定愈伤组织增殖不同阶段的可溶性蛋白、丙二醛(MDA)、澳洲茄碱和澳洲茄边碱含量,测定其细胞活力、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)活性,并绘制生长曲线。取得如下研究成果:1、随着萌发过程的推进,可溶性糖含量呈先升高后降低的变化趋势;可溶性蛋白含量呈降低-升高-降低的变化趋势,;淀粉含量呈升高-降低-升高的变化趋势;IAA含量呈现逐渐增加的变化趋势;GA3呈现降低-升高-降低的变化趋势;ZT呈现先升高后降低的变化趋势;ABA含量随着种子的萌发逐渐降低。IAA与淀粉呈显著负相关,ABA与淀粉呈极显著正相关,IAA与ABA呈极显著负相关。IAA/ABA、GA3/ABA、ZT/ABA的比值随龙葵种子置床萌发时间的增加而呈现出不同程度的升高趋势。2、龙葵种子净度约81.26%,千粒质量为(2.94±0.12)g,含水量约为7.85%,吸水率最高达87.15%,即自然风干种子质量的1.87倍。以质量浓度为150~200 mg/L的GA3溶液浸种24h,42℃水浴2 h,处理效果最优,可有效提高龙葵种子萌发率及成苗率。3、在盐胁迫下龙葵种子萌发指标受到抑制,经过外源ALA处理后,种子发芽势、发芽率、活力指数及发芽指数均显著提高;龙葵幼苗经过ALA处理后,显著提高了叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素、总叶绿素的含量;降低了原生质膜透性及叶片MDA含量;提高了可溶性蛋白及游离脯氨酸含量;使叶片SOD、POD、CAT活性得到显著提升。外源ALA通过提高龙葵种子的萌发指标,提高幼苗叶片光合色素、渗透调节物质含量及抗氧化酶活性,降低细胞质膜损伤程度,有效减缓Na Cl胁迫对龙葵种子及幼苗造成的损伤,提高其抗盐性。4、龙葵茎段为最佳外植体,诱导愈伤组织的最适培养基为MS+NAA1.43mg/L+6-BA 2.15mg/L+KT2.48mg/L,最适增殖培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L,愈伤组织鲜重增长量呈“S”型趋势,细胞活力20d时达到最高峰值,可溶性蛋白含量与POD活性均呈先升高后降低的趋势,SOD活性在20d与30d出现两个峰值,MDA含量呈先降低后升高的变化趋势,在培养后期PPO活性下降,可能与愈伤组织褐化有关,澳洲茄碱与澳洲茄边碱含量变化趋势一致,在第30d时达到最高峰值。龙葵愈伤组织生长期为25d,同时其也为最适的愈伤组织鲜重收获期,25d后会出现不同程度褐化。