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目的：通过细胞学研究探索Klotho在结肠癌细胞中的表达与其启动子DNA甲基化状况的关系,明确其对结肠癌细胞株生长的影响,初步探索Klotho基因与结肠癌之间潜在的关系。方法和材料：采用RT-PCT技术检测Klotho在结肠癌细胞株HCT116、HT29、DLD1、LS180、SW480和SW620中的表达,用甲基化特异性PCR(MSP)检测Klotho在上述结肠癌细胞株中的DNA甲基化水平。用去甲基化药物5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-dC)处理结肠癌细胞株HCT116、HT29、LS180和SW620,并检测Klotho表达状况。通过细胞转染和筛选,观察Klotho对结肠癌细胞HCT116和HT29克隆形成的影响。用MTS方法检测Klotho过表达对结肠癌细胞HT29生长繁殖的影响。结果：Klotho在结肠癌细胞株HCT116和HT29中表达沉默,在DLD1,LS180和SW620细胞中表达显著下调,在正常结肠组织中有高表达。MSP／USP显示Klotho启动子在结肠癌细胞株DLDl,HCT116,HT29,LS180和SW620中完全或部分甲基化。去甲基化药物5-氮杂-2’-脱氧胞苷处理结肠癌细胞株HCT116、HT29、LS180和SW620后,Klotho恢复表达或表达显著增加。说明Klotho在结肠癌细胞中表达“沉默”或显著下调与启动子DNA高甲基化有关。通过细胞转染,发现过表达Klotho后结肠癌细胞株HCT116和HT29克隆形成数较转染空载体的对照组减少,克隆体积减小。MTS检测发现当原始铺板浓度是2000个／孔时,第1天,第3天和第5天pcDNA3.1组HCT29细胞吸光度分别是0.6680±0.0234,1.4394±0.0597,1.6968±0.0251,Klotho组HCT29细胞吸光度分别是0.5814±0.0118,0.9760±0.0622,1.6264±0.0205,即Klotho组细胞密度明显小于pcDNA3.1组,两者之间存在显著性差异(p<0.01)。当原始铺板浓度是4000个／孔时,第1天,第3天pcDNA3.1组HCT29细胞吸光度分别是0.9512±0.0319,1.7370±0.0330,Klotho组HCT29细胞吸光度分别是0.7534±0.0165,1.5352±0.1370,Klotho组细胞密度明显小于pcDNA3.1组,两者之间存在显著性差异(p<0.05)。第5天pcDNA3.1组吸光度为1.7098±0.0252,Klotho组为1.7228±0.0224,两者没有显著性差异(p>0.05)。提示Klotho过表达能抑制结肠癌细胞株HT29的生长繁殖。结论：Klotho在多株结肠癌细胞株中表达沉默或低表达,启动子DNA高甲基化与此密切相关。体外试验证明Klotho具有抑制结肠癌细胞株克隆形成和细胞生长的作用。研究结果说明Klotho基因对结肠癌具有潜在抑癌作用,Klotho在结肠癌中的表达受到表观遗传学——启动子DNA甲基化机制的调控。