本实验室已将乳酸片球菌素pedA基因与pMD18-T载体和表达质粒pET32a(+)连接所构成的重组质粒转化到E.coli BL21(DE3)基因工程菌中,构成了用大肠杆菌表达片球菌素的表达系统。本研究旨在研究在E.coli BL21(DE3)基因工程菌表达片球菌素的分离纯化和理化性质。　　 本研究对两种诱导方法诱导E.coli BL21(DE3)基因工程菌表达片球菌融合蛋白——使用IPTG诱导和使用ZYM-5052培养基自动诱导进行了比较,结果表明使用ZYM-5052培养基自动诱导的表达效果优于IPTG诱导,自动诱导最终菌液的OD600在7左右,而IPTG诱导只有3左右,产生的包涵体蛋白在相同条件下溶解,自动诱导的蛋白浓度为0.2359mg／ml,而IPTG诱导只有0.1001mg／ml。　　 由于E.coli BL21(DE3)基因工程菌的高效表达,所形成的片球菌素融合蛋白的形式为包涵体,为了获得具有活性的基因工程片球菌素,本研究对包涵体的提取、溶解、和多种复性方法,包括稀释复性、反稀释复性、透析复性、CTAB辅助复性和CTAB和β-CD结合辅助复性等方法进行了研究。实验结果表明,CTAB和βp—CD结合辅助复性的复性方法优于其它的复性方法,可以实现较高的初始变性蛋白浓度,较小的复性液体积和达到相对稳定的复性率。为了实现基因工程片球菌素的分离纯化,将复性后并浓缩到一定体积基因工程片球菌素在肠激酶缓冲液中用肠激酶处理,可以实现基因工程片球菌素和硫氧还蛋白的分离,基因工程片球菌素带有His标签,将酶切后蛋白溶液注入Ni-MDA亲和重力柱,在500mmol／L咪唑的条件下可以被洗脱下来。洗脱的最高蛋白浓度达到0.014mg／ml。　　 本研究对基因工程片球菌素的抑菌活性和部分理化性质如热稳定性、酸碱耐受性、酶敏感性进行了分析。结果表明基因工程片球菌素对植物乳杆菌,单核细胞增多症李氏杆菌有抑菌作用。基因工程片球菌素的热稳定性较好,经121℃高压处理后仍显示出部分抑菌活性,在pH值1-7范围内活性稳定,pH值7-14范围内活性逐渐下降,并可以被胰蛋白酶,胃蛋白酶,木瓜蛋白酶和蛋白酶K降解。　　 将基因工程片球菌素应用于酸奶,发现对其中的单核细胞增多症李氏杆菌有良好的抗菌作用。　　 本试验建立诱导方法和基因工程片球菌素分离纯化方法,为基因工程片球菌素的大规模生产和应用奠定了基础。