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猪血中含有丰富的营养物质和多种具有生物活性的物质,蕴藏着巨大的开发潜力和利用价值。而大部分猪血被废弃,既浪费了宝贵的生物资源又造成严重的环境污染,利用猪血资源研制和开发高附加值的生化产品,不仅可以增加经济效益,还可以减轻对环境的污染。
本论文以提高猪血的综合利用价值为目的,对从猪血中制备凝血酶及纤维蛋白原工艺流程做了研究。具体研究内容和结果如下:
1.猪血的抗凝处理:收集经检验合格的新鲜猪血,用3.8％的柠檬酸钠溶液与血液按体积比1:9混合抗凝。
2.血浆与血细胞的分离条件:抗凝血浆在4000 r/min,离心10 min,分别收集上清液(血浆)和下层沉淀(血细胞),放在低温下备用。
3.纤维蛋白原提取工艺研究:利用冻融法分离纤维蛋白原。优化后条件为:抗凝血浆在-20℃下冷冻12 h,4℃下解冻,2500 r/min离心15 min,收集沉淀(纤维蛋白原)和上清液(用来制备凝血酶)。在该条件下制备的样品中纤维蛋白原含量84.3％,纤维蛋白原提取率为88％。
4.凝血酶分离提取工艺:分别采用等电点沉淀法和柠檬酸钡吸附法制备凝血酶原,研究这两种方法的最佳工艺。
(1)等电点沉淀法分离凝血酶原的工艺条件:用去离子水将血浆稀释9倍,2％醋酸溶液调节pH5.3,4℃静置过夜,虹吸去上清液,3500 r/min,离心15 min,收集凝血酶原沉淀,沉淀物溶于含0.9％NaCl的0.075％草酸钾溶液,搅拌溶解1h,3500 r/min,离心15 min,收集上清液为凝血酶原粗样液。
(2)柠檬酸钡吸附法分离凝血酶的工艺条件:向血浆加入其体积12％的1mol/L的BaCl2溶液,磁力搅拌1 h后3500 r/min转速下离心15 min,收集柠檬酸钡沉淀,将沉淀溶于等体积的pH8.0的0.2 mol/L EDTA溶液中,搅拌1 h,3500 r/min离心15 min,弃去不容物,上清液用0.05 mol/L pH7.2的Tris-HCl缓冲液透析,至无Ba2+为止。得凝血酶原粗样液。
5.凝血酶纯化:比较用724树脂和纤维素DE-52离子交换层析法纯化凝血酶的效果。用纤维素DE-52离子层析所得到的凝血酶比活与回收率分别为1031.74 u/mg,88.4％;用724树脂纯化的凝血酶比活和回收率分别为126.40u/mg,55.78％,纤维素DE-52纯化效果比较好。
6.凝血酶部分性质的研究:凝血酶作用于纤维蛋白原的最适温度为37℃,pH值为7。
本实验研究了猪血中凝血酶和纤维蛋白原的提取分离工艺,为猪血的综合利用提供了一定的理论依据,使猪血的综合利用程度和附加值都有所提高,为综合利用猪血提供了新的思路和方法。