【摘 要】
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目的:构建稳定过表达Notch1的胞内段(Notch1 intracellular domain,NICD)的牙周膜干细胞,探讨过表达NICD基因对人牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)增殖能力的影响。方法:复苏课题组前期冻存的人牙周膜干细胞,进行传代培养,35代用于实验。构建含NICD基因过表达的逆转录病毒颗粒,并将其转染至牙周膜干细胞,嘌
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目的:构建稳定过表达Notch1的胞内段(Notch1 intracellular domain,NICD)的牙周膜干细胞,探讨过表达NICD基因对人牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)增殖能力的影响。方法:复苏课题组前期冻存的人牙周膜干细胞,进行传代培养,3~5代用于实验。构建含NICD基因过表达的逆转录病毒颗粒,并将其转染至牙周膜干细胞,嘌呤霉素筛选,构建过表达NICD的细胞株PDLSCs/NICD。PDLSCs/NICD为实验组,以PDLSCs/wt为正常细胞组和PDLSCs/vector空病毒转染组作为对照,通过qRT-PCR(quantitative Real time-polymerase chain reaction)和Western blot检测NICD mRNA及其蛋白的表达;CCK-8法检测细胞的增殖情况;Transwell实验检测细胞的迁移能力。结果:Western blot和qRT-PCR结果显示,与PDLSCs/wt组和PDLSCs/vector组比较,PDLSCs/NICD组的NICD蛋白表达水平及其mRNA水平均明显升高(P<0.05);CCK-8结果提示,与PDLSCs/vector组比较,PDLSCs/NICD组细胞增殖速度加快,Transwell实验结果显示,PDLSCs/NICD组的细胞迁移(40.20±1.74)明显高于PDLSCs/vector组(21.20±1.18)。结论:NICD基因过表达的人PDLSCs在一定程度上增殖及迁移能力加强。
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