涎腺粘液表皮样癌是一种起源于涎腺导管上皮的常见恶性肿瘤。占口腔颌面部肿瘤发病率的2.74％，占涎腺上皮性肿瘤的12.45％，约占恶性肿瘤的30％。17β-雌二醇(E2)是一种重要的内源性激素，由卵巢成熟卵泡所分泌。具有促进女性副性器官的生长发育及性酶的合成和代谢、水钠储留的作用，同时可降低胆固醇、β-脂蛋白以及胆固醇与磷脂的比例等作用。临床主要用于治疗更年期综合症、卵巢功能不全和闭经、功能性子宫出血、乳房胀痛、晚期乳腺癌、前列腺癌、骨质疏松症以及痤疮等疾病。 随着雌二醇在临床治疗的大量应用，越来越多的观察和研究发现雌激素发挥治疗作用的同时也潜存着巨大的副作用。例如，它与肿瘤的关系就极为复杂，一方面，药理剂量的雌激素或其代谢产物有致癌作用，对某些肿瘤可促进增殖转移；另一方面，在生理条件下，雌激素对某些肿瘤有抑制作用。促进肿瘤发生发展的作用机理主要是雌激素与雌激素受体(ER)结合，促进涎腺粘液表皮样癌Mc3细胞周期蛋白(Cyclin)、细胞周期蛋白依赖性激酶(Cdks)、原癌基因(Bcl-2)的表达以及PRb的磷酸化；抑制细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白的表达(CDI)的表达；从而促进细胞周期G1／S期的转换，加速S期细胞DNA的合成，促进细胞增殖，而发挥促进肿瘤发生发展的作用。 本研究应用细胞计数法，MTT细胞增殖试验，软琼脂克隆形成试验，流式细胞术，免疫组织化学染色，图像分析，裸鼠颌下腺原位移植瘤实验 第四军医大学硕士学位论文等方法，探讨17p一雌二醇对涎腺粘液表皮样癌Mc3细胞增殖相关生物学特性的影响并探讨其作用机制。主要试验结果如下:1 .EZ对涎腺粘液表皮样癌Mc3细胞增殖的促进作用1.1应用细胞计数法检测，测试浓度(mol/L)为10一，、10一，10一7，药物作用时间为1一7天。作用第1天后E2就对Mc3细胞增殖具有促进作用，尤其在培养第3天，处理组的细胞群体倍增时间近缩短甲半。对照组人粘液表皮样癌Me3细胞群体倍增时间为36h，而经10一，、10一8、10一，mol/L EZ处理后的细胞群体倍增时间(h)分别为:27.9、28.8、25.7。计数第7天时，各处理组细胞数比对照组增加率(%)分别为:11、9、20。E2促进细胞增殖的作用呈明显的剂量依赖性及时间依赖性。1 .2 MTT细胞增殖实验显示:对照组和各药物处理组(1丫、10一日、10一了mol/l)细胞培养第5天时，各处理组细胞数比对照组增加率分别为:29%、54%、59%。1.3克隆形成率:EZ处理组的Mc3细胞克隆形成率明显高于对照组，当EZ浓度为10一7mol/L时，其细胞克隆形成率增加51 .9%。1.4流式细胞仪测得经EZ(10月、10一8、10一，mol/l)处理Me3细胞12小时后，S期细胞数目稍有增多。作用24小时S期细胞比例分别增加(%)了:11.3、6.6、46.7:细胞增殖指数分别增加(%)了:6.0、3.6、 205.5，为原有细胞增殖指数的3倍。1 .5 EZ对涎腺粘液表皮样癌的试验性促进作用:裸鼠体内领下腺原位接种1 .ox 106/0 .2ml个细胞7天后，对照组及试验组裸鼠领下腺致瘤性均为5/5，22天后试验组肿瘤重量比对照组增加(%)了:563 .7、926.2、949.5、553.9、455.1。2 .EZ对涎腺粘液表皮样癌Mc3细胞和皮下致瘤后的肿瘤组织中PCNA、cyelinDI、Bel一2和p27表达的影响2.1在不同浓度EZ作用下，PCNA、Cy。1 inDI、Bel一2在Me3细胞和肿瘤组织中的表达增强，并随药物浓度的增高而增加。PCNA对照组阳性表达率为62%，10一、10一‘、10一，mo 1/1的各药物浓度组阳性表达率(%)分别为:78、74、98;对照组和各药物浓度组Cycl inDI阳性表达率(%)分别为:80、93、87、99;对照组和各药物浓度组的Bcl一2阳性表达率(%)分别 第四军医大学硕士学位论文48、82、77、93。2.2 P27在培养细胞和肿瘤组织中的表达均降低，与药物浓度呈负相关。对照组和各药物浓度组(10一9、10一日、10一，mol/1)阳性表达率(%)分别为:88、59、62、40。 综上所述，生理浓度(10下一1丫mol厂L)的E2能促进Mc3细胞系细胞周期Gl/S期的转换，使处于S期的细胞量增加，加速S期细胞DNA合成，从而加快Mc3细胞系细胞增殖速率，这种作用可能与PCNA、Cyc 1 inD卜Bcl一2蛋白水平增高、P2’Z阳性表达率及其蛋白表达量降低有关。EZ对涎腺粘液表皮样偏的发生、发展可能有促进作用，详细机制有待于进一步深入研究。鉴于以上实验结果，雌激素在临床中应注意严密观察，严格遵守医嘱，合理服用。