目前,鸡肉已成为我国仅次于猪肉的第二大肉类消费品。随着人民生活质量的不断提高,优质肉鸡以肉质鲜嫩多汁,风味独具特色,逐渐成为消费者的首选。多年以来,由于育种工作者对于肉鸡高生长速度的过度追求,导致现代肉鸡品种出现了腹部脂肪过度沉积的现象。腹部脂肪过多既浪费日粮能量,还影响屠宰性状降低了生产性能。因此,如何通过育种解决肉鸡腹部脂肪过度沉积的问题是肉鸡育种工作者当前所面临的重要挑战。而解析鸡腹部脂肪沉积的遗传调控机理是利用分子育种技术改良腹脂性状的重要前提。为了解析鸡脂肪沉积的遗传调控机理,本课题组前期成功分离获得鸡脂肪前体细胞,并诱导分化,利用RNA-seq分析了细胞分化过程基因表达水平。其中,GAS6基因在鸡脂肪前体细胞分化过程中显著上调,预示其可能促进鸡脂肪前体细胞分化。本研究将以GAS6基因为研究目标,利用分子生物学技术分析其对鸡重要经济性状的遗传效应,并验证其在鸡脂肪前体细胞分化中的功能。主要结果如下:1、本研究利用PCR-SSCP技术检测GAS6的外显子单核苷酸多态性,并与金茅黑鸡重要经济性状进行相关分析。结果显示:GAS6外显子10的27463 bp处存在一处C-T的突变(g.C27463T),形成EE、EF和FF三种基因型,该位点多态信息含量、杂合度和有效等位基因数分别为0.352、0.543和1.84。关联分析显示,在屠体性状上,EE基因型个体活重、屠体重、半净膛重、全净膛重、脚重、胸肌重、腿肌重显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)高于FF基因型个体。在肉质性状上,FF基因型个体胸肌的水分含量显著高于EF基因型个体(P<0.05);EF基因型个体粗脂肪含量极显著(P<0.01)高于EE基因型个体,FF基因型个体粗脂肪含量显著(P<0.05)高于EE基因型;EF基因型个体肌苷酸含量显著(P<0.05)高于EE基因型个体。因此,EE基因型为屠体性状的优势基因型,EF基因型为腿肌脂肪和肌苷酸含量的优势基因型,可在金茅黑鸡选育过程中选留EE基因型个体,改良屠体性状,选留EF基因型个体,提高腿肌粗脂肪和肌苷酸的含量,进而改善肉品质。2、为了研究GAS6的组织分布及其在腹脂中的发育性表达,选取4周龄金茅黑鸡,采用RT-qPCR技术检测GAS6在金茅黑鸡组织的表达分布,选取高表达组织检测其在金茅黑鸡1日龄4、8、12、16周龄不同时期的发育性表达。分析结果显示:GAS6在公鸡和母鸡腹脂中均高表达,GAS6在公鸡不同发育阶段腹脂中呈“M”表达趋势,而在母鸡则呈“W”的趋势表达,但公、母鸡均在4周龄之前出现表达高峰,表明GAS6可能通过参与调控鸡脂肪前体细胞分化,进而影响腹脂早期发育。3、前期研究已经发现GAS6基因多态性与鸡腹脂和肌内脂肪含量性状显著相关,且在腹脂组织中高表达,预示其可能参与调控鸡脂肪沉积。为探究GAS6在鸡脂肪沉积中的功能,本研究分别构建GAS6基因腺病毒干扰载体和过表达质粒,转染脂肪前体细胞,诱导分化,检测分化过程中PPARγ、C/EBPa和FAS的表达、甘油三酯含量,分析干扰和过表达GAS6对鸡脂肪前体细胞分化的影响。结果表明:与对照组相比,干扰组PPARγ、C/EBPa和FAS的表达均在分化的不同时期被抑制,相反,过表达GAS6促进PPARγ、C/EBPa和FAS的表达;油红O染色及甘油三酯分析结果表明,GAS6基因干扰组甘油三酯的含量极显著低于对照组(P<0.01),而GAS6过表达组甘油三酯含量极显著高于对照组(P<0.01)。上述结果表明,GAS6基因促进鸡脂肪前体细胞的分化。