论文部分内容阅读
酶解羽毛粉是一种新型动物蛋白原料,但在水产动物饲料中的应用较少。为综合评价酶解羽毛粉（EFM）替代鱼粉（FM）蛋白在大菱鲆（Scophthalmus maximus L.）饲料中的应用效果,利用角蛋白酶将水解羽毛粉（SFM）在体外进行酶解（p H值7.5,反应温度50℃）制得酶解羽毛粉,研究羽毛粉替代鱼粉蛋白对大菱鲆生长、饲料利用、体组成以及营养代谢的影响,从而判断酶解羽毛粉替代鱼粉的潜力。本实验以EFM和FM为主要蛋白源配制6种等氮、等能的饲料,各组EFM的添加量依次为0%（Control）,8%（EFM8）,16%（EFM16）,24%（EFM24）,32%（EFM32）,40%（EFM40）,以替代0%,16%,32%,48%,64%,80%的FM蛋白。第7组（EFM24+AA）实验饲料添加赖氨酸和蛋氨酸,使其含量达到对照组水平。第8组饲料（SFM24）用24%的SFM替代48%FM蛋白。选取重量为（34.47±0.02）g的大菱鲆幼鱼随机分配到24个桶,每桶40尾鱼,共8组,每组3个重复,每天饱食投喂两次,实验周期7个周,实验期间,水温16.0-18.0℃,盐度31.0-33.0,溶氧>6.0mgl-1,氨氮<0.10mg L-1,流速为10L min-1。结果表明:1)饲料中添加EFM对大菱鲆幼鱼成活率、鱼体及肌肉必需氨基酸含量、淀粉酶及胰蛋白酶活性无影响（P>0.05）,但显著降低了蛋白质消化率及脂肪酶活性（P<0.05）,显著提高了鱼体及肌肉水分含量（P<0.05）;2)EFM16-EFM40组大菱鲆幼鱼的终末重（FBW）、体增重（WG）、饲料效率（FE）、摄食率（DFI）、蛋白质效率（PER）、肌肉蛋白含量、胃蛋白酶活性以及干物质、脂肪、能量、氨基酸的表观消化率呈下降趋势（P>0.05）;3)EFM24组大菱鲆体蛋白、体脂肪含量显著降低（P>0.05）;4)EFM32组大菱鲆幼鱼肥满度及脏体比显著下降（P<0.05）;5)SFM24组大菱鲆生长性能、饲料利用、体蛋白、体酪氨酸含量、肌肉脂肪含量、脂肪酶活性以及蛋白质、缬氨酸（Val）、亮氨酸（Leu）、苯丙氨酸（Phe）、组氨酸（His）、精氨酸（Arg）、丝氨酸（Ser）、谷氨酸（Glu）、丙氨酸（Ala）、甘氨酸（Gly）、半胱氨酸（Cys）、脯氨酸（Pro）的消化率显著低于EFM24组（P<0.05）;6)EFM24+AA组大菱鲆幼鱼生长性能、饲料利用、肥满度、体蛋白含量、肌肉蛋白含量以及干物质、蛋白、脂肪、赖氨酸（Lys）、蛋氨酸（Met）消化率显著、脂肪酶与胃蛋白酶活性显著高于EFM24组（P<0.05）。研究表明,大菱鲆饲料中添加8%的EFM不影响营养物质的消化率和鱼体正常生长。补充赖氨酸和蛋氨酸可显著提高大菱鲆生长及饲料利用性能。指标测定所需血清及肝脏均取自生长实验中大菱鲆幼鱼,旨在测定大菱鲆幼鱼血清指标、肝脏抗氧化、营养代谢及血浆游离氨基酸总量。结果表明:1)饲料中添加EFM对大菱鲆血液葡萄糖含量、谷草转氨酶（GOT）、谷丙转氨酶（GPT）活性及葡萄糖激酶（GK）、磷酸烯醇式丙酮酸激酶（PEPCK）基因相对表达量无显著影响（P>0.05）;2)随着EFM的添加果糖-1,6-二磷酸酶（FBP）与葡萄糖-6-磷酸酶（G6Pase）基因相对表达量呈先升后降趋势（P<0.05）;3)当EFM添加量高于8%时显著降低了肝脏GOT活性及丙酮酸激酶（PK）基因表达量（P<0.05）;4)EFM添加量高于16%显著降低了血液中高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）、总胆固醇（T-CHO）、甘油三酯（TG）含量及肝脏GPT活性（P<0.05）;5)当EFM添加量高于24%时显著降低了肝脏过氧化氢酶（CAT）活性,并显著提高了肝脏丙二醛（MDA）含量（P<0.05）;6)当饲料中EFM添加量高于32%时显著降低了血液总蛋白（TP）含量及肝脏总超氧化物歧化酶（TSOD）活性（P<0.05）;7)饲料中添加40%的EFM显著降低了血液白蛋白（Alb）含量（P<0.05）。8)EFM24+AA组血清生化指标与EFM24组无差异（P>0.05）,但显著提高了肝脏GOT活性及果糖-1,6二磷酸激酶基因表达量（P<0.05）;9)SFM24组血液TP含量、肝脏GOT、GPT活性显著低于EFM24组（P<0.05）;10)对照组、EFM24组幼鱼血浆游离氨基酸在2h达到最高峰,SFM24组在8h达到最高峰。综上所述:本研究结果表明,饲料中添加EFM不会对大菱鲆的肝脏造成损伤,当EFM添加量超过8%时,会降低转氨酶活性,并降低血液中脂类及蛋白的含量。EFM24组血浆总游离氨基酸到达峰值时间早于SFM24组。由FM（C）组、EFM24（F）组和SFM24（P）组中各选择一桶作为本实验的处理组,在无菌条件下取大菱鲆幼鱼肠道做高通量测序技术分析。本实验旨在研究EFM及SFM替代FM蛋白对大菱鲆幼鱼肠道微生物群落结构的影响,结果显示:1)三个组中12个样品总有效序列为372939条,C组、F组和P组的操作分类单元（OUT）个数分别为982、859和1059,其中C组与F组、C组和P组、F组与P组共有的OUT个数分别为351、413和247;2)由细菌注释结果可知,大菱鲆幼鱼中占优势地位的菌门为变形菌门（Proteobacteria）、厚壁菌门（Firmicutes）、放线菌门（Actinobacteria）和拟杆菌门（Bacteroidetes）,与C组对比,F组与其组成一致且比例较为接近,但P组主要菌门组成有差异且比例相差较大,这表明F组饲料不影响大菱鲆肠道菌群;3)由物种丰度热图可知,构成丰度较高的前3个菌门与C组及F组相同,与P组相差较大,样品中丰度最高的前50个OTU中,均未发现大菱鲆常见致病菌,表明饲料中添加EFM和SFM均不会导致幼鱼肠道内致病菌群的定植。综上可知:饲料中添加24%的EFM对大菱鲆幼鱼肠道菌群构成不产生影响,但添加24%的SFM会改变大菱鲆幼鱼肠道菌的构成并在一度程度上使菌群丰度增加,两种羽毛粉的加入不会导致大菱鲆幼鱼肠道内致病菌丰度提高。