胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，疾病早期手术是主要的治疗措施，化疗在进展期胃癌综合治疗中处于不可缺少的重要地位。目前国内外常用的化疗方案有效率在50％～70％，仍有一部分胃癌患者治疗失败。近年来研究表明肿瘤细胞对化疗药物的敏感性下降是影响治疗失败的主要原因。p53抑癌基因是目前与化疗敏感关联最高的基因，60％的胃癌存在p53的点突变。p53基因的突变与缺失不仅可诱导细胞基因不稳定及恶性分化，而且与肿瘤细胞对化疗的敏感性亦有密切关系。化疗药物产生细胞损伤导致肿瘤细胞周期阻滞并诱导细胞凋亡。正常功能的野生型p53对化疗药物引起的细胞周期阻滞和凋亡起促进作用，而p53基因的变异将失去这种功能，这是产生肿瘤细胞化疗抵抗性的重要原因之一。因此导入野生型p53基因修复细胞内突变的异常p53基因可增加化疗敏感性。重组人p53腺病毒制品（recombinant adenovirus-p53 rAd-p53）是利用腺病毒为载体，将P53基因导入癌细胞中，诱导癌细胞的凋亡，促进癌细胞的溶解死亡。国内外基础及临床应用研究表明：rAd-p53不仅增加肿瘤细胞对放化疗的敏感性，而且与化疗药物无交叉毒性并明显减少放化疗的副作用，起到增效减毒的临床疗效。目前rAd-p53的临床应用主要集中在头颈部肿瘤、肺癌、乳腺癌等，涉及到胃癌的治疗研究很少。顺铂、紫杉醇是临床胃癌化疗方案中常用药物，药物的耐药性是限制其临床应用的一个主要原因。本研究的目的是研究重组人p53腺病毒感染不同p53状态胃癌细胞，观察外源p53基因在胃癌细胞内的表达，对肿瘤细胞周期阻滞与凋亡的影响，以及对胃癌细胞化疗敏感性的作用和机制。为开辟新的胃癌治疗途径，更好的使用rAd-p53治疗胃癌，提高胃癌的临床疗效尤其是rAd-p53与化疗药物的科学联合应用提供可靠的实验基础。材料与方法：1．细胞选用三种携带不同p53状态人胃癌细胞系BGC-823：即含野生型p53基因的细胞（略写为W）、含突变型p53基因的细胞（略写为M）．含空载质粒即p53基因缺失的细胞（略写为neo）。2．实验药物选用rAd-p53（recombinant adenovirus-p53 rAd-p53）、顺铂（cis-dismine dichoroplatinum，DDP），紫杉醇（paclitaxel，TAX）。3．MTT比色法测定不同浓度的单药及联合用药作用细胞的生长抑制率，并绘制生长曲线。4．流式细胞仪检测细胞的周期分布和凋亡率。5．免疫细胞化学与Western blotting法检测感染rAd-p53细胞中p53蛋白表达。6．统计学处理：采用SPSS10.0统计软件，统计学数据用均数±标准差（（?）±S）表示，计量资料满足正态性，方差齐时多组均数间比较行单因素方差分析（one-way ANOVA），均数间的两两比较采用LSD方法；每组处理前后的比较用配对t检验；P≤0.05具显著性。结果：1．免疫细胞化学法检测显示：5×10⁷VP／ml rAd-p53感染三种胃癌细胞48h后，p53蛋白阳性表达于瘤细胞的细胞核内。neo对照组细胞未见p53表达，而W和M对照组细胞则呈弱阳性表达。rAd-p53作用W细胞48h后，实验组p53的蛋白表达的阳性率（50.20±4.84）％显著高于对照组（14.15±3.44）％（P＜0.001）；rAd-p53作用M细胞48h后，实验组p53的蛋白表达的阳性率（63.74±4.21）％显著高于对照组（30.80±5.32）％（P＜0.001）：rAd-p53作用neo细胞前未见p53表达，rAd-p53作用neo细胞48h后，实验组p53的蛋白表达的阳性率（48.87±5.88）％。2．Western Blotting结果显示：5×10⁷VP／ml rAd-p53感染三种胃癌细胞48h后在53KD位置上均有一条清晰的杂交带，对照组neo细胞在同一位置无杂交带，而对照组W细胞和M细胞则在53KD处有很浅的一条杂交带。3．不同浓度的rAd-p53、DDP、TAX单药作用48h后，三种胃癌细胞生长均受到不同程度的抑制，所有实验组与对照组间及不同浓度实验组之间OD值比较（P＜0.01）。结果显示，三种药物均可有效抑制三种胃癌细胞BGC-823的生长。其抑制效应呈剂量依赖性。rAd-p53对BGC-823细胞的生长抑制与细胞内在的p53状态无关。DDP、TAX同浓度组作用三种不同p53状态的BGC-823细胞比较，作用于W细胞的生长抑制率高于M与neo细胞（P＜0.01），M与neo细胞比较P＞0.05。M与neo较W细胞IC₅₀（median inhibitingconcentration，半数抑制浓度）值增高。4．不同浓度的rAd-p53、DDP、TAX联合用药作用于三种胃癌细胞，所有实验组与对照组间及各实验组之间OD值比较（P＜0.01）。rAd-p53+DDP与rAd-p53+IAX对M细胞的生长抑制率高于W与neo细胞（P＜0.01），W与neo细胞比较P＞0.05。实验结果表明，rAd-p53与DDP、TAX联合用药，均可有效抑制三种胃癌细胞的生长，呈剂量依赖性。rAd-p53感染三种胃癌细胞48h后联合DDP、TAX用药较DDP、TAX单药对细胞生长抑制率增高（P＜0.01），DDP、TAX的IC₅₀值下降。5．根据MTT结果绘制rAd-p53与DDP、TAX单用和联合对三种胃癌细胞BGC-823的生长曲线：不同浓度的rAd-p53与DDP、TAX单用和联合作用三种不同p53状态的胃癌细胞24、48、72h的体外生长抑制曲线表明对胃癌细胞的抑制作用均呈时间依赖性和剂量依赖性效应。6．流式细胞仪检测rAd-p53与DDP、TAX单用和联合应用对三种胃癌细胞BGC-823细胞周期变化与凋亡效应：6．1对于W细胞，与空白对照组比：单纯rAd-p53作用出现G₂／M期明显阻滞，凋亡率为9.33％±1.27％；单纯加DDP出现以G₁期为主的阻滞，凋亡率为30.8％±1.53％；单纯加ZAX出现G₂／M期明显阻滞，凋亡率为33.5％±2.05％；rAd-p53+DDP发生G₂／M期阻滞，凋亡率为47.7％±1.66％；rAd-p53+ZAX发生更明显G₂／M期阻滞，凋亡率为52.8％±2.35％；以凋亡作为化疗增效效应，rAd-p53+DDP的增效比为1.55，rAd-p53+TAX的增效比为1.58。6．2．对于M细胞，单纯rAd-p53作用出现G2／M期明显阻滞，凋亡率为11.76％±2.33％；单纯加DDP出现以G₁期为主的阻滞，凋亡率为24.7％±2.42％；单纯加ZAX出现G2／M期明显阻滞，凋亡率为29.89％±1.9％；rAd-p53+DDP发生G₂／M期阻滞，凋亡率为51.88％±2.03％；rAd-p53+ZAX发生更明显G₂／M期阻滞，凋亡率为60.2％±2.33％；以凋亡作为化疗增效效应，rAd-p53+DDP的增效比为2.1，rAd-p53+TAX的增效比为2.01。6．3．对于neo细胞，单纯rAd-p53作用出现G2／M期明显阻滞，凋亡率为10.97％±1.5％；单纯加DDP出现以G₁期为主的阻滞，凋亡率为23.2％±1.58％；单纯加TAX出现G₂／M期明显阻滞，凋亡率为26.8％±1.47％；rAd-p53+DDP发生G₂／M期阻滞，凋亡率为44.3％±2.26％；rAd-p53+TAX发生更明显G₂／M期阻滞，凋亡率为50.53％±2.28％；以凋亡作为化疗增效效应，rAd-p53+DDP的增效比为1.91，rAd-p53+TAX的增效比为1.89。7．rAd-p53单药感染三种细胞24、48h分别进行caspase-3蛋白表达定量分析，以公式荧光指数（FI）表示蛋白的相对含量。FI＞1.0为阳性表达，FI≤1.0为阴性表达。结果显示：对照组W、M细胞呈弱阳性表达，neo细胞呈阴性表达。rAd-p53感染三种细胞24、48hcaspase-3蛋白表达有时间依赖性。三细胞实验组与对照组及实验组之间比较P＜0.01。同时间组caspase-3蛋白表达比较P＞0.05。结论：1．rAd-p53可抑制三种不同p53状态胃癌细胞的生长及诱导细胞凋亡，该作用不受内源性p53状态的影响。rAd-p53对细胞的生长抑制作用呈剂量时间依赖性效应，并使细胞周期阻滞于G2／M期。2．rAd-p53感染三种胃癌细胞48h后实验组三细胞均有p53蛋白强阳性表达，而对照组W、M细胞有弱阳性表达，neo细胞p53蛋白表达阴性；rAd-p53可上调凋亡相关蛋白caspase-3的表达。3．rAd-p53联合TAX、DDP可抑制三种胃癌细胞的生长，抑制作用较单药时增加。联合作用时化疗药物IC50值较单药下降，诱导细胞凋亡率增高，细胞的周期分布与单药作用不同。4．携带突变与缺失p53基因的M、neo细胞对ZAX、DDP敏感性下降，rAd-p53感染纠正了胃癌细胞内变异的p53基因，增加胃癌细胞对ZAX，DDP的敏感性。