多孔陶瓷吸附—戊二醛交联固定化乳糖酶的研究

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本文对乳糖酶的固定化方法进行了研究。以期解决游离酶生产低乳糖牛乳用酶时量大、生产成本高,带入外源蛋白不易去掉的问题。先用陶瓷吸附,再用戊二醛交联制备固定化酶;测定了固定化酶的相关参数,结果如下:1.四种陶瓷为载体进行乳糖酶吸附实验,找出了固定乳糖酶效果最好的载体是直径为1cm表面镀三氧化二铝膜的多孔陶瓷微球;用该载体进行乳糖酶吸附实验,结果表明:在流速为0.5mg/ml,pH=6.5,温度为25℃,酶溶液浓度为1.5mg/ml的条件进行固定化,固定化酶的相对酶活最大。2.用陶瓷为载体,戊二醛为交联剂,当用戊二醛浓度为1.2%,时间为4h,温度为39℃进行交联后,获得固定化酶活为115.4μ/g,(相对于游离乳糖酶的酶活为262.2μ/g),固定化酶活力回收率为44%。3.实验得到的固定化酶最适表观作用温度为50℃,最适pH=7。固定化酶的Km=0.78mol/L,Vm=593.43μmol/(g min)相对于游离酶的Km=0.31mol/L,Vm=634.58μmol/(min g)。固定化酶与底物的结合能力下降。固定化酶在低温条件经过9周以后活性可以保持在95%以上,有较好的保存性。4.对固定化酶连续水解牛乳生产低乳糖乳的使用条件及其稳定性进行了研究,结果表明:在填充床反应器中,在保留时间为270min、反应温度为50℃、酶床质量为35.5g、底物流速F=40ml/h条件下,可获得73.2%的乳糖水解率,符合达到低乳糖乳中乳糖含量75%左右的要求。固定化乳糖酶连续水解牛乳,其半衰期为11天。本文的研究结果,为工业化利用固定化乳糖酶法生产低乳糖乳提供了基础。
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