【摘 要】
：
第一部分TRIM59抑制TC45去磷酸化STAT3促进EGFR/EGFRvⅢ胶质母细胞瘤发生发展目的:EGFR/EGFRvⅢ亚型胶质母细胞瘤致病因子和致病机制不明,本研究旨在探讨TRIM59在EGFR/EGFRvⅢ亚型胶质母细胞瘤发生发展中的作用及分子机制。方法:利用免疫组织化学染色检测胶质母细胞瘤组织中TRIM59的表达水平,并分析其表达与胶质母细胞瘤患者预后的关系;通过细胞增殖实验、软琼脂克隆
【基金项目】
：
国家自然科学基金（81572467、81372704）； 上海交通大学医学院博士创新基金（BXJ201819）；
论文部分内容阅读
第一部分TRIM59抑制TC45去磷酸化STAT3促进EGFR/EGFRvⅢ胶质母细胞瘤发生发展目的:EGFR/EGFRvⅢ亚型胶质母细胞瘤致病因子和致病机制不明,本研究旨在探讨TRIM59在EGFR/EGFRvⅢ亚型胶质母细胞瘤发生发展中的作用及分子机制。方法:利用免疫组织化学染色检测胶质母细胞瘤组织中TRIM59的表达水平,并分析其表达与胶质母细胞瘤患者预后的关系;通过细胞增殖实验、软琼脂克隆形成实验和颅内原位移植瘤模型观察敲低TRIM59对EGFR/EGFRvⅢ胶质母细胞瘤生物学行为的影响;采用蛋白免疫印迹、实时荧光定量PCR和双荧光素酶报告基因实验检测EGFR/EGFRvⅢ对TRIM59表达的调控作用;利用RNA-Seq和基因富集分析检测敲低TRIM59对EGFR/EGFRvⅢ下游信号通路的影响;通过蛋白免疫印迹和免疫共沉淀技术探索TRIM59介导EGFR/EGFRvⅢ调控STAT3信号通路的分子机制。结果:TRIM59在胶质母细胞瘤中表达明显高于正常组织和低级别胶质瘤组织,高表达TRIM59的胶质母细胞瘤患者预后不良;敲低TRIM59明显抑制EGFR/EGFRvⅢ促进的胶质母细胞瘤细胞增殖、克隆形成和体内肿瘤生长;EGFR/EGFRvⅢ通过SOX9转录上调TRIM59表达;敲低TRIM59明显抑制了STAT3磷酸化和其靶基因的表达;EGFR激活促进TRIM59与STAT3在细胞核内发生结合,并且两者的结合对于TRIM59介导EGFR促进胶质母细胞瘤细胞增殖、克隆形成和体内肿瘤生长有重要作用;TRIM59与STAT3结合竞争性抑制TC45与STAT3的结合,进而抑制TC45去磷酸化STAT3,维持STAT3高磷酸化水平和该通路的活化;最后在胶质母细胞瘤组织样本中进一步证明p-EGFR/TRIM59、TRIM59/p-STAT3高表达患者预后较差。结论:TRIM59可以作为胶质母细胞瘤预后判断的临床标志物。TRIM59竞争性抑制TC45去磷酸化STAT3而激活STAT3信号通路,对EGFR/EGFRvⅢ促进胶质母细胞瘤发生发展具有重要作用。第二部分CDK5依赖的TRIM59磷酸化和入核促进EGFR/EGFRvⅢ胶质母细胞瘤发生发展目的:探索TRIM59磷酸化和向细胞核转移的分子机制以及细胞核内TRIM59参与调控EGFR/EGFRvⅢ胶质母细胞瘤发生发展的分子机制。方法:利用免疫荧光实验和核浆分离实验检测EGFR/EGFRvⅢ对TRIM59核转移的作用;小分子激酶抑制和核浆分离实验筛选介导EGFR促进TRIM59入核的激酶分子;通过免疫荧光实验和核浆分离实验检测CDK5蛋白激酶对TRIM59入核的作用;采用免疫共沉淀技术和GST pull-down技术检测TRIM59与CDK5的结合情况;体外激酶实验检测CDK5对TRIM59的磷酸化作用;蛋白免疫印迹、免疫共沉淀和免疫荧光检测PIN1/importinα5在TRIM59入核中的作用;通过免疫共沉淀和蛋白质谱分析检测核内TRIM59结合的蛋白;蛋白免疫印迹和蛋白泛素化实验检测TRIM59对macro H2A1蛋白稳定性和泛素化降解的作用;染色质免疫沉淀技术和实时荧光定量PCR检测TRIM59降解macro H2A1对STAT3靶基因表达的影响;利用细胞增殖、克隆形成实验及颅内原位移植瘤模型检测TRIM59入核对胶质母细胞瘤生物学行为的影响;免疫组织化学染色检测EGFR/CDK5/TRIM59/STAT3信号轴的临床意义。结果:EGFR激活促进TRIM59向细胞核转移,EGFR酪氨酸激酶抑制剂厄洛替尼处理抑制TRIM59核转移;CDK5抑制剂Roscovitine抑制EGFR激活促进的TRIM59核转移,敲除CDK5明显抑制了TRIM59核转移,并且TRIM59核转移依赖于CDK5激酶活性;EGFR激活促进CDK5和TRIM59相互结合,CDK5使TRIM59 S308氨基酸位点发生磷酸化;TRIM59核转移依赖于TRIM59磷酸化;磷酸化TRIM59募集PIN1,PIN1促进TRIM59与importinα5结合;TRIM59入核依赖于自身的核定位信号序列和importinα/β1转运系统;TRIM59入核后与macro H2A1结合并通过泛素化降解macro H2A1调控其蛋白稳定性;TRIM59泛素化降解macro H2A1促进STAT3靶基因表达;TRIM59入核促进胶质母细胞瘤细胞增殖和体内肿瘤生长;在p-EGFR阳性的胶质母细胞瘤组织中存在p-CDK5、p-TRIM59、p-STAT3的共表达,并且这部分患者预后不佳。结论:CDK5磷酸化TRIM59促进TRIM59核转移,核内TRIM59泛素化降解macro H2A1促进STAT3靶基因表达,EGFR/CDK5/TRIM59/STAT3信号轴对EGFR/EGFRvⅢ胶质母细胞瘤的发生发展具有重要作用。
其他文献
第一部分 saRNA激活肾癌细胞E-cadherin基因表达及其机制目的:检测肾癌细胞中的E-cadherin基因表达,观察E-cadherin表达水平与肾癌发生的相关性。遴选能和E-cadherin基因启动子区域序列互补的saRNAs,明确saRNA对肾癌细胞系ACHN和786-O细胞E-cadherin表达的激活效应。材料与方法:收集2016年8月2016年11月期间于瑞金医院泌尿外科手术并经
目的:制作多孔Se@SiO2纳米球涂层导尿管并探究其对尿道前列腺切除术（TURP）后前列腺部尿道部创面愈合速度的影响及分子机制,为减少前列腺术后并发症提供新思路。方法:1、制备多孔Se@SiO2纳米球,通过XRD和TEM技术鉴定其微观结构。并利用DCFH-DA探针等技术检测其活性氧（ROS）清除能力及生物安全性。再将多孔Se@SiO2纳米球溶于壳聚糖溶液中制作涂层导尿管。同时测定导尿管的涂层厚度、
研究背景:子痫前期（Preeclampsia,PE）是以妊娠20周后出现高血压及蛋白尿为主要临床特征的一种妊娠期高血压疾病,是导致我国孕产妇及围产儿死亡的主要原因之一。近年来研究发现补体系统在正常妊娠的过程中发挥着重要的作用,但补体系统的异常激活却可引起PE的发生。补体C5a作为补体系统中最重要的活化产物之一,但其在PE发病中的潜在机制仍未可知。研究目的:明确C5a是否参与PE的发生,并探讨其潜在
目的:本研究目的为探索SPARCL1是否与早期自然流产有关,研究SPARCL1在人滋养细胞迁移中的作用与机制。方法:1.收集2015-2016年在上海交通大学医学院附属仁济医院因胚胎停育和主动要求终止妊娠行人工流产术的患者的绒毛组织样本,提取mRNA与蛋白,通过蛋白免疫印迹法与荧光实时定量PCR检验,比较两组间SPARCL1的表达是否有差异。2.构建pIRES2-EGFP-SPARCL1重组质粒,
研究目的:本研究拟通过斑马鱼模型及细胞学实验研究JAG1对肠神经系统（Enteric nervous system,ENS）发育形成的影响及具体机制。明确JAG1是否可以通过Notch通路影响肠神经前体细胞的增殖和迁移,进而影响ENS的形成和先天性巨结肠的发生,以期为进一步了解先天性巨结肠的发病机制提供新方向。研究方法:首先在正常小鼠结肠及非先天性巨结肠患儿结肠标本中验证JAG1蛋白的表达情况,并
胶原蛋白是人体内含量最多的蛋白质,起着维持组织和器官结构完整性的作用。它在内质网（ER）中的折叠和组装需要多种辅助蛋白的参与,如脯氨酸3-羟化酶（P3H）、脯氨酸4-羟化酶（P4H）、分子伴侣HSP47等。其中脯氨酸3-羟化酶复合物（P3H1/CRTAP/PPIB）可以特异性地羟化I型胶原α1链986位的脯氨酸,同时该复合物还具有二硫键异构酶和脯氨酰顺反异构酶的活性。大量临床研究发现该复合物中任一
免疫、生长和繁殖都是猪育种中的重要数量性状。阐明这些数量性状的遗传机制是猪育种工作者的重要研究任务之一。而随着全基因组范围内的分子标记检测技术的发展,存在着大量的利用数量性状基因座位（quantitative trait loci,QTL）定位、全基因组关联分析（genome-wide association study,GWAS）来对这些性状各自的分子遗传机制进行解析的研究。更重要的是,这些性状
当今世界范围内结核病疫情依旧严峻。耐药性结核病持续威胁着人们的健康。针对结核分枝杆菌尤其是耐药性结核分枝杆菌的毒力研究将为药物开发与疫情控制提供重要的理论基础。结核分枝杆菌摄取铜具有重要的生理意义。然而,其摄取机制尚未得到阐明。ABC转运蛋白因其广泛参与物质跨膜转运而受到人们关注。其中Rv1273c-Rv1272c经多项研究证实与结核分枝杆菌毒力密切相关,而该转运蛋白的功能尚未得到揭示。前期研究中
免疫毒素是一种由靶向部分连接毒素部分组成的融合蛋白。其中,靶向部分通常是抗体、抗体片段或生长因子等具有导向功能的生物活性分子,能够通过特异性识别细胞表面的受体将毒素部分靶向传递至病变细胞。毒素部分普遍具有较强的细胞毒性,通过受体介导进入细胞后,可以发挥杀灭病变细胞的功能。根据来源不同划分,毒素部分可以来自微生物、植物、昆虫和动物等。绿脓杆菌外毒素和白喉毒素是两种获得广泛研究的细菌毒素,目前已有相应
目的:女性罹患慢性肾脏病的数目显著低于男性,且进展至终末期肾脏病的速度也明显低于男性,但是这种保护作用在女性进入绝经后期逐渐消失。雌激素的撤退无法完全解释绝经后女性肾功能恶化,提示可能存在其他因素参与调控肾脏疾病发展并发挥重要作用。实际上,绝经所引起的激素改变不仅仅表现为血清雌激素水平的降低,同时伴有FSH水平的剧增。高循环FSH水平可能参与绝经相关的病理改变的现象已经引起人们关注。目前尚无流行病