【摘 要】
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本实验团队经过多年的研究工作,已从林地中筛选得到一种真菌,为白腐真菌,命名为毛栓菌27-1,该菌可以高产漆酶,漆酶酶活测得可达94.39 U。漆酶具有催化苯环开环的能力,能降解木质素和酚酸类化合物等物质,因此有必要探究该菌对竹木质素和酚酸类化合物的降解效能,为利用该菌缓解竹林地土壤酸化提供理论基础。(1)对微生物降解木质素有较大影响的初始温度、初始p H、转速、接种量和装液量等五个因素进行单因素的
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本实验团队经过多年的研究工作,已从林地中筛选得到一种真菌,为白腐真菌,命名为毛栓菌27-1,该菌可以高产漆酶,漆酶酶活测得可达94.39 U。漆酶具有催化苯环开环的能力,能降解木质素和酚酸类化合物等物质,因此有必要探究该菌对竹木质素和酚酸类化合物的降解效能,为利用该菌缓解竹林地土壤酸化提供理论基础。(1)对微生物降解木质素有较大影响的初始温度、初始p H、转速、接种量和装液量等五个因素进行单因素的试验优化,得到在初始温度为30℃,初始p H为5,转速为200 r·min-1,接种量为7.5%,装液量为150 m L时,毛栓菌27-1对竹叶木质素降解能力较好。接着运用响应面优化,基于Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验和Box-Behnken试验,获得拟合方程Y=51.95+0.89 A-0.28 B-0.30C+0.67 AB+0.32 AC+0.64 BC-4.09 A2-1.04 B2-1.11 C2。最终确定毛栓菌27-1降解竹木质素最佳条件是初始温度为28.2℃,接种量为7.37%,装液量为153.65 m L,初始p H为5,转速为200 r·min-1,此时降解率可达51.74%。(2)采用超高效液相色谱检测法,通过测定菌液处理后酚酸含量变化,研究毛栓菌27-1漆酶对10种酚酸类化合物的降解特性。结果表明,毛栓菌27-1漆酶能完全降解酚酸类化合物中的香草酸、咖啡酸和芥子酸;丁香酸、阿魏酸和龙胆酸的降解效果一般,降解率50%左右;原儿茶酸的降解效果较差,降解率达35%;不能降解香豆酸、对羟基苯甲酸和绿原酸。研究不同条件下毛栓菌27-1漆酶降解酚酸类化合物丁香酸的效能,发现在p H 5、温度30℃、丁香酸初始浓度小于100 mg·L-1时,菌株对丁香酸具有高效降解能力,ABTS溶液作为介体物质加入降解体系后降解效果更好,在浓度为0.5 mmol·L-1时,降解率可达到100%。(3)对毛栓菌27-1漆酶提取纯化,纯化过程中存在明显的酶活损失,最后回收率为13.30%,SDS-PAGE蛋白电泳检测结果表明该漆酶蛋白分子大小为60k Da。
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