目的:本文提出一种生物化学发光方法学,用于流感病毒、禽流感病毒、新城疫病毒的快速诊断,以及流感病毒达菲耐药性检测。文中包括试剂及仪器的研制方案及性能检测结果。本项目解决了传统的诊断方法易受病毒基因变异影响的问题。方法:项目利用萤光素-萤光素酶发光原理,以病毒的神经氨酸酶作为检测标志物。合成神经氨酸酶特异性底物,样本中的神经氨酸酶切割底物,游离出萤光素,萤光素被试剂预置的萤光素酶氧化而发光,光强与酶的活性成线性关系。在试剂中加入达菲,通过比较加入达菲前后的发光强度的变化来诊断是否存在达菲耐药。禽流感达菲不耐药,而新城疫达菲耐药,因此可以对两者区别诊断。仪器设计有24个通道,使用光电倍增管作为光电转换器件,试剂在仪器中完成恒温孵育后检测发光的光强值,并计算样本中酶的活性。结果:实验数据显示,流感检测项目的重复性、灵敏度、特异性、干扰物分析、稳定性均达到标准要求;分别在四家医院展开临床实验,阳性符合率95.24%以上,阴性符合率96.43%以上,总体符合率96.19%以上。达菲耐药最低检测浓度为953 TCID50/m L。以IC50为金标准对照实验,耐药毒株检测率为100%,非耐药毒株检测率100%;禽流感、新城疫检测的灵敏度、特异性满足要求,临床样本检测结果与PCR的比较,阳性符合率达100%。结论:根据测试结果,本设计的仪器与试剂组合,达到临床检验标准,满足快速诊断要求。