microRNAs介导成纤维细胞转分化为神经元的实验研究

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目的:探索借助成熟microRNAs重编程大鼠成纤维细胞(fibroblasts)为神经元的转分化的实验方法。方法:取新生大鼠皮肤原代成纤维细胞体外培养并扩增,经差速贴壁纯化、免疫荧光鉴定后,以第三代成纤维细胞为重编程对象,以lip2000为micoRNAs的投送载体,将筛选后的microRNAs(miR-9/9*,miR-124,miR-128)的模拟物mimics转染成纤维细胞,并行qPCR检测转染前后成纤维细胞内目标microRNAs的变化,于转染后的1周,2周,3周,4周进行免疫荧光观察,检测神经元前体细胞标记物Pax6及神经元特异性标记物MAP2、βⅢ tubulin、NF200的表达。结果:成纤维细胞转染microRNAs后1-4周,Pax6免疫荧光检测均阴性;在转染后2周,成纤维细胞形态发生类似神经元改变,免疫荧光检测结果显示神经元特异性标记物MAP2(阳性率约10%),βⅢ tubulin(阳性率约50%)、NF200(阳性率约60%)均阳性。结论:借助成熟microRNAs可将大鼠成纤维细胞高效的重编程为神经元样细胞。
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