构建转基因细胞检测亲电性化学污染物的研究

来源 :扬州大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xiekc
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
亲电性化学物是指在环境污染物中一大类可与细胞生物大分子上的亲核中心相结合或可通过生物转化相结合的化合物,除可以引起急、慢性中毒外,还可引起肿瘤。亲电性化学物是环境中的主要污染物,所以越来越引起环境科学研究者的高度关注。 环境污染物多数为亲电性(Electrophile)化学物质,如TCDD,CdCl2,多氯联苯,HgCl2,Pb(C2H3O2)2等。国外许多学者研究发现[1-6],在哺乳动物细胞中,具有与亲电性化学物发生反应的特异DNA基序(Motif),称为亲电性物质反应元件(ElectrophileResponseElement,EPRE),这一基因的调控区基序是非常保守的,调控下游有关基因的表达。EPRE可介导多种与机体抗氧化有关的基因的表达,如γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶基因,半胱氨酸谷胱甘肽转移酶基因等,其酶活性的表达程度与亲电性化学污染物对EPRE激活程度有关,两者间存在剂量反应关系。 本研究根据细胞双杂交原理,分别从p(Gal4)5-TK/CAT和pMT/V5-His扩增TK(胸腺嘧啶)和MT(金属硫蛋白)基因基本启动子,分别与虫荧光素酶报告基因(LUC)相连,将人工合成的亲电性化学反应元件(EPRE)插入LUC的上游,构建成亲电性化学物调控的LUC报告载体(pEPRE-TK-LUC和pEPRE-MT-LUC)。用脂质体将pERRE-TK-LUC和pEPRE-MT-LUC分别转染于HeLa细胞和昆虫细胞(Sf9)。用瞬时表达法发现重组HeLa细胞荧光素酶与亲电性化学物氯化汞、氯化镉和亚砷酸钠具有剂量效应关系,而重组Sf9与亲电性化学物无剂量效应关系,这可能是Sf9对亲电性化学物质的毒性特别敏感。用G418对重组HeLa细胞进行筛选,阳性细胞经顺丁烯乙酸二乙酯(DEM)实验,发现荧光素酶与DEM间存在剂量效应关系。然而,在正常的pH条件下,底物D-荧光素不能进入细胞,在测定荧光素酶的表达量时,必须通过裂解细胞。由于荧光素酶的催化效率极高,故发出的光非常短暂(<10秒),这为高通量监测亲电性化学物的污染程度的实际应用造成了困难。建议进一步研究可持续发光的细胞监测亲电性化学污染物。
其他文献
本文对中国宁夏回、汉族人群的MBL基因突变进行研究,获得的数据,为进一步研究MBL基因突变与乙型肝炎间的关联和个体感染乙型肝炎的基因背景的影响提供线索。研究结果表明: 1.
语文教学需要培养的语文核心素养是理解运用思维审美等四个维度.在爱种子的教学模式下,利用靠、轮、摆、析、赏、辩、记这七字真言,在语文阅读教学中培养语文核心素养,让学生
文化德育,就是基于优秀文化的思想道德教育.文化德育站在文化高度,遵循文化规律,运用文化方式,用优秀文化熏陶人,用时代内涵引领人,以实现立德树人的根本任务.基于文化德育背
在素质教育环境下,小学语文低年级教学更应该注重学生语文素养的发展,从学生的语用能力、思维能力、情感价值方面培养学生的语文学科核心素养,思考提高低年级学生语文学习能
学位
在石油资源枯竭和环境污染的双重压力下,生产节能环保型汽车成为了汽车产业的最新发展目标,各大汽车企业和高校纷纷投入到新能源汽车的研究工作。蓄电池及其电池管理系统(Batte
语文是一门语言学科,在于提高学生学习能力与综合素质,并让学生在学习中形成正确思想观念以及良好的思维能力.阅读是学生深化基础知识和提高语文核心素养的关键途径,教师在教