不同品种越橘根系共生真菌的分离鉴定及多样性分析

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越橘为杜鹃花科(Ericaceae)越橘属(Vaccinium)植物,是具有较高经济价值和广阔发展前景的小浆果树种。本研究以吉林农业大学浆果园矮丛越橘‘美登’(Blomidon)、半高丛越橘‘北陆’(Northland)和北高丛越橘‘甜心’(Sweetheart)根系为试材,观察越橘菌根结构类型,分析越橘根系共生真菌多样性并建立越橘和真菌共生体系,为进一步研究越橘属植物与菌根真菌间的共生互作机制奠定基础,为菌剂的研究与产业化开发提供科学依据。主要结果如下:(1)实验以3个不同品种的越橘根系为样本,经碱解离-酸性品红染色法观察发现,矮丛越橘‘美登’菌根类型以典型的杜鹃花类菌根(Ericoid mycorrhizas,ERM)为主,少数根样中有外生菌根的存在;半高丛越橘‘北陆’根系同时观察到杜鹃花类菌根和深色有隔内生菌根(Dark septate endophytes,DSE);北高丛越橘‘甜心’根系中仅检测到杜鹃花类菌根。(2)本研究采用根段直接培养法分离根系共生真菌,利用真菌通用引物ITS1/ITS4扩增菌株的rDNA ITS序列;PCR产物测序后在GenBank中进行BLAST比对。实验分别从‘美登’、‘北陆’、‘甜心’根系中分离获得49、126、37个菌落,依据菌落形态特征分为40个类型;BLAST分析结果显示,鉴定到属水平的真菌有31个,包含15个属;鉴定到目水平的有4个,包含2个目;无法确定分类地位的真菌有5个。由此可见,越橘根系共生真菌种类丰富,包括优势或典型的树粉孢属真菌。(3)根据GenBank中已有的真菌序列对本究的ITS区进行分析,然后采用非加权组平均法(UPGMA)构建系统发育树。结果显示,40个共生真菌的ITS序列总长为414~538bp,GC含量为45.42%~59.14%;其中,ITS1长103~246 bp,GC含量为39.83%~64.63%;5.8S长158~161 bp,GC含量为44.72%~48.13%;ITS2长121~192 bp,GC含量为46.45%~74.42%。聚类结果显示,40个类型的共生真菌划分为4大类。分离自‘美登’、‘北陆’、‘甜心’的共生真菌在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类3个分支上都有分布,第Ⅰ类属于锤舌菌纲、第Ⅱ类属于肉座菌目、第Ⅲ类属于格孢腔菌目;分离自‘北陆’的共生真菌NO08单独聚在第Ⅳ类。(4)选择典型或优势菌种BL01、NO22和SW17进行回接试验发现,BL01和SW17可以在根系细胞内形成菌丝团,NO22能够在根系细胞中形成深色有隔菌丝和微菌核,三者均可以侵染越橘根系形成菌根,并促进根系的生长。
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