目的： 本文采用酵母双杂交方法，寻找近日节律系统中的核心分子PERIOD1的相互作用蛋白，并研究其作用分子RACK1在近日节律分子振荡机制中的作用。包括二部分：1、酵母双杂交筛选近日节律蛋白PER1-PAS结构域的相互作用蛋白；2、RACK1的近日节律相关研究。 方法： 实验一：酵母双杂交筛选PER1-PAS结构域的相互作用蛋白将PER1蛋白PAS结构域的编码序列定向克隆入pGBKT7诱饵质粒中构建hPerl-PAS／pGBKT7重组诱饵质粒，并通过同源重组的方式构建人脑cDNA文库，采用顺序转染的方法构建酵母双杂交系统，继而检测报告基因表达筛选阳性克隆，PCR扩增阳性克隆文库质粒内的插入片段，生物信息学分析发现PER1新的相互作用分子，最后采用体外转录、免疫共沉淀实验验证蛋白间相互作用。 实验二：RACK1的近日节律功能研究 采用PMA体外诱导小鼠NIH3T3成纤维细胞的节律基因表达，半定量RT-PCR方法检测编码RACK1的Gnb2ll mRNA的变化规律；12D／12L光暗循环以及全黑条件下记录BALB／C小鼠的自发性转轮运动，半定量RT-PCR方法检测小鼠脑内Gnb2ll mRNA的变化规律；采用能导致行为节律位相移动的光脉冲刺激DD条件下的小鼠，观察立早基因Gnb2ll的光敏感性反应。免疫组化检测PER1蛋白表达不同时相的RACK1分布改变。