lncRNA FAM83A-AS1通过Hippo通路促进胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

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研究目的:胰腺癌恶性程度高,预后差,且在国内外目前的诊治方法均有限。lnc RNA已被证实在不同类型的肿瘤疾病中发挥了重要作用,有的可以抑制,而有的可以促进。FAM83A-AS1作为一种lnc RNA,其已在肺癌、肝癌、食管癌等均已有一定的研究,而在胰腺癌中的作用机制尚未得到具体探讨,本文拟探讨FAM83A-AS1在胰腺癌细胞生物学行为中的作用,并探究存在机制,为FAM83A-AS1在胰腺癌中靶向治疗提供理论依据。研究方法:1.通过Ualcan、GEPIA网站分析FAM83A-AS1在胰腺癌中的表达变化。2.通过荧光定量PCR方法检测胰腺癌细胞株Pa Tu-8988、PANC-1、Bx PC-3中FAM83A-AS1表达量,并与正常胰腺细胞株HPDE6-C7对比;3.分别导入敲减小干扰RNA si-FAM83A-AS1、构建过表达质粒pc DNA 3.1 FAM83A-AS1,并验证敲减和过表达转染效率;4.上调或下调胰腺癌细胞中FAM83A-AS1的表达,通过CCK8试剂盒、划痕、细胞克隆形成、Transwell实验来验证其在增殖、迁移、侵袭细胞生物学功能的作用;5.通过Western blot法研究其对EMT、Hippo-YAP信号通路相关蛋白表达水平的影响。研究结果:1.通过Ualcan、GEPIA网站分析显示lnc RNA FAM83A-AS1在正常人与胰腺癌患者胰腺组织中表达存在差异,胰腺癌患者表达较健康人群表达高,预后差。2.通过PCR证实,FAM83A-AS1在不同胰腺癌细胞株系表达存在差异,Pa Tu-8988、PANC-1、Bx PC-3均较正常胰腺细胞株系表达量高,其中Pa Tu-8988表达相对较低,Bx PC-3表达相对较高,PANC-1表达介于两者之间。3.用胰腺癌细胞株系通过小干扰RNA敲减和过表达质粒对FAM83A-AS1进行敲减和过表达,并用PCR验证其表达成功。4.上调FAM83A-AS1表达后,与未上调的对照对比显示,可以促进胰腺癌细胞株增殖、克隆形成、迁移、侵袭,反之亦然。5.上调FAM83A-AS1表达后,与未上调的对照对比显示,EMT相关蛋白:E-钙粘附蛋白表达水平显著降低,Vimentin、Snail、N-钙粘附蛋白表达水平显著增加。6.上调FAM83A-AS1表达后,与未上调的对照对比显示,Hippo-YAP通路相关蛋白p-YAP、p-MOB1、p-LAST1、SAV、MST1及MST2表达水平显著降低,YAP、MOB1、LAST1等表达水平显著增加。研究结论:1.FAM83A-AS1可促进胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭,促进了EMT形成,是胰腺癌的促癌因子。2.FAM83A-AS1可能是在胰腺癌细胞中通过调节Hippo-YAP通路得以促进肿瘤进展。
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