峰A和峰B是郑州大学生物毒素中心利用多项分离技术组合，选择不同柱长和流速，对蝎毒抗癌多肽（antineoplaticpolypeptide from Buthus martensii venom，APBMV）进一步的分离、纯化而得到的两个组分，关于它们抗肿瘤作用尚有待研究。本试验在体外实验条件下，探讨两个组分对MGC-803细胞和BCaP-37细胞的杀伤作用，以及对肿瘤细胞的周期、细胞内周期相关蛋白表达水平以及细胞内Ca²⁺含量的影响，以期深入研究峰A和峰B的肿瘤抑制作用和机理。 本实验采用MTT比色法、生长抑制实验、集落形成实验等观察峰A和峰B对人低分化胃粘液腺癌细胞（MGC-803）和人乳腺髓样癌细胞（BCaP-37）的细胞毒作用和生长抑制作用。MTT法的结果显示峰A对MGC-803细胞有明显的毒性作用，其毒性与剂量呈显著依赖关系（r=0.984，P＜0.02）处理48h后的IC₅₀为225.119mg／L。峰A对BCaP-37细胞无明显的毒性作用。峰B对MGC-803细胞和BCaP-37细胞均具有显著 郑州大学医学院2002研究生论文 东亚钳蝎毒素峰A和峰B抗肿瘤作用及其机制的实验研究的毒性作用（＜0．of），量效关系显著（ 分别为0．989和0．998，P＜0．01）处理48h后1q。分别为16．386瞰和17．179m叭。生长抑制实验表明，峰A和峰B在一定剂量范围内 门～15＜叭 )对M＊＊803细胞有显著的生长抑制作用瞩1刀1)，存在剂量－效应关系 ＊分别为0．994不0．99O，P＜0＊1人1q。分别12．823m叭和 6．368m叭。峰A和峰B还可显著的抑策MGC．803细胞的集落形成率瞩叩刀1)，并有明显的量效关系U分别为0．997和0．987，P＜0刀幻，其lq。分另为5石36m叭禾门＊90mg／L。 为了进一步探讨峰A和峰B对MGC七03细胞和 BCaP习7毒性作用和生长抑制作用的机理，本实验应用流式细胞术检测了加入药物后肿瘤细胞周期、细胞内 Ca’”含量以及 PCNA。P53P16蛋白表达水平的改变。结果显示：①峰A处理MGC七03细胞48h后，可阻滞其细胞周期，GJG；期细胞明显增多，S期细胞减少，与对照组相比，差异有显著性瞩刃刀匀，细胞内＊53和P16表达水平较对照组显著降低（＊。0＊1或P＜0＊01），细胞内C旷“含量显著升高o刃．02或P仍．om)，而细胞内PC NANA表达未见明显变化。加入峰B处理48h后，与对照组相比，MGCE03细胞周期阻滞于G。心；期，S期细胞明显减少o＜0＊2)，＊53、P16禾P＊＊A表达都显著降低（＜0＊2或 2 郑州大学医学院2002研究生论文 东亚钳蜗毒素峰A和峰B抗肿痫作用及其机制的实验研究0＊0门。②峰B处理＊＊J－＊ 细胞舶h后，与对照红十 ＊，氏／；朋细胞明显增多，S期细胞明显减少0、0刀2＊肿瘤细胞内Ca卜含量显著升高卯刃刀2人PCNA的表达显著降低0仍刀2或P“0＊of），而 P53和 P16白表达未见显著变化。结论1．峰A对MGCE03细胞具有显著的毒性作用和生长抑制 作用，且呈现出明显的量效关系。对BCaP习7细胞作用 不明显，所以峰A抗肿瘤作用有选择性；峰B对MGC－ 803细胞和 BCaP刁7细胞有毒性作用和生长抑制作用， MGCE03细胞较BCaP37细胞敏感。2．加入峰A后，MGCE03细胞周期阻滞于GO／GI期；当峰 A浓度较高时细胞内PCNA的表达水平显著降低，而低 浓度时变化不明显；P53和 P16表达水平均显著降低； 细胞Rca’“含量显著升高。3．加入峰B后，MGC个03细胞周期阻滞于G。0；期，细胞 内 PCNA、P53及 P16表达水平显著降低，细胞内 Cay 含量显著升高；BC妒上7细胞周期阻滞于GO鹰期，细 胞中PCNA表达水平显著降低，细胞内Ca卜含量显著升 高，而N 及P53的改变不明显，无统计学意义。