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本论文主要探讨miRNAs在肺腺癌发病中的作用,分为两部分进行研究,第一部分是研究miR-21调节MSH2表达在肺腺癌A549细胞中的作用；第二部分是探讨miR-140/miR-206在肺腺癌细胞中的作用。1.miR-21调节MSH2表达在肺腺癌A549细胞中的作用研究(1)miR-21对MSH2表达的调控作用利用microRNA分析软件预测MSH23’-UTR存在miR-21的调控位点。为了进一步探索在A549细胞中miR-21和MSH2之间的作用,我们构建了pcDNA-GFP-msh-UTR载体,合成了miR-21分子,将miR-21和pcDNA-GFP-msh-UTR载体共同转染A549细胞,通过荧光显微镜和流式细胞仪检测GFP表达,结果表明与对照组相比,miR-21转染组pcDNA-GFP-msh-UTR表达量明显降低,Western blotting检测进一步证实miR-21确实可以降低MSH2表达。(2)miR-21调节MSH2表达对肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响miR-21在多种肿瘤中具有癌基因的作用,MSH2高表达可以促进癌细胞凋亡。顺铂是有效的治疗肺癌的化疗药物之一,在细胞水平和个体水平研究顺铂对A549细胞增殖的影响,然后利用实时定量PCR检测miR-21的表达,结果发现,不论是细胞水平还是个体水平miR-21的表达量都明显降低了。进一步利用Western blotting检测MSH2表达发现,与对照组相比顺铂治疗A549细胞以后MSH2表达量升高了。这些结果表明顺铂可以降低miR-21表达,因此上调MSH2表达。在MSH2高表达的基础上,我们进一步检测了A549细胞的增殖。在细胞水平利用MTT检测结果显示MSH2高表达可以明显抑制A549细胞增殖。进一步通过Annexin V-FITC/PI双染检测细胞的凋亡变化,结果表明MSH2高表达组A549细胞凋亡率明显高于对照组。个体水平,经过顺铂治疗以后,MSH2表达升高并且肿瘤的体积和重量都明显减小。这些结果表明降低miR-21表达上调MSH2表达可以抑制肺腺癌A549细胞增殖。2. miR-140/miR-206在肺腺癌细胞中的作用研究(1) miR-140/miR-206参与了TGF-β1信号通路利用microRNA分析软件发现Smad33’-UTR存在miR-140/miR-206的调控位点。构建pcDNA-GFP-smad3-3’UTR载体并将其与miR-140或miR-206共同转染肺腺癌细胞。48h后,荧光显微镜和流式细胞仪检测结果均表明与对照组相比miR-140/miR-206转染组pcDNA-GFP-smad3-3’UTR表达量明显降低。Western blotting进一步验证结果证实miR-140/miR-206均可以降低p-Smad3表达,这表明miR-140/miR-206可以负性调控Smad3依赖的TGF-β1信号通路。利用TGF-β1处理肺腺癌细胞,实时定量PCR检测miR-140/miR-206表达变化,结果显示与对照组相比,miR-140/miR-206表达量都明显降低。表明]miR-140/miR-206参与了TGF-β1信号通路。(2) miR-140/miR-206对肺腺癌细胞增殖和转移的作用miR-140/miR-206降低p-Smad3表达以后,利用Western blotting检测发现,TRIB2表达显著降低。TRIB2是癌基因,我们在TRIB2表达降低以后进一步检测了A549细胞的增殖。MTT检测结果显示miR-140/miR-206有效抑制A549细胞增殖；Annexin V-FITC/PI双染结果表明miR-140/miR-206可以明显促进A549细胞的凋亡。然后我们在个体水平来研究发现,与对照组相比,miR-140/miR-206治疗组肿瘤的体积和重量都明显减小。利用实时定量PCR检测发现miR-140/miR-206表达量显著升高；Western blotting检测发现p-Smad3表达显著降低。因此,miR-140/miR-206可以通过降低p-Smad3表达进一步抑制TRB2表达来抑制肺腺癌细胞增殖。EMT (epithelial mesenchymal transition,上皮细胞间质转化)与肿瘤转移初始阶段有关。Smad3是TGF-β1信号通路诱导EMT的核心分子。miR-140/miR-206处理肺腺癌细胞后,Western blotting结果显示上皮标记E-cadherin表达升高,间质细胞标记a-SMA表达降低了。Transwell迁移实验结果显示,转染miR-140/miR-206以后,发生迁移的细胞数目减少。表明miR-140/miR-206可以抑制肺腺癌细胞转移。综合以上的研究,miR-21可以调节MSH2的表达,抑制miR-21表达进而促进MSH2表达可以抑制肺腺癌细胞的增殖。miR-140/miR-206可以通过调控Smad3依赖的TGF-β1信号通路进而影响TRIB2的表达来抑制肺腺癌细胞的增殖。