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农业生产中产生了大量的秸秆等废弃物,建立有效的秸秆处理方式是十分必要的。在秸秆降解的过程中,难点在于木质纤维素的分解,严重影响秸秆的降解速率。本课题对堆肥样品中具有降解木质纤维素作用的嗜热放线菌和霉菌进行了分离筛选,研究了适合这些菌株生长的培养基质、水分含量、pH等条件,并对筛选出的降解木质纤维素能力较强的3株嗜热霉菌和3株嗜热放线菌进行了组合培养和培养基配方优化。 采用稀释涂布平板法从蘑菇堆肥中分离获得嗜热霉菌27株和嗜热放线菌42株。采用刚果红染色鉴定法、滤纸条培养法、苯胺蓝平板褪色法和愈创木酚平板褪色法筛选获得既可以降解纤维素又可以降解木质素的8株嗜热放线菌和8株嗜热霉菌菌株。经初步鉴定,嗜热霉菌M2、M8、M24、M31菌株属于青霉属(Penicillium), M14属于长梗串孢霉属(Monilochaetes),M22属于毛霉属(Mucor),M26属于拟青霉属(Paecilomyces),M28属于曲霉属(Aspergillus);所获得的8株嗜热放线菌均属于链霉菌属(Streptomyces),并根据16S rDNA序列的比对结果确定了AG3、AG4、BG23、FG25、FG35和FG39菌株的分类地位,EG16和EG17菌株在GenBank数据库中没有找到与其相似的已知的16S rDNA序列。这些菌株的最适培养温度为45℃。 通过比较在巴西蘑菇菌糠、棉籽壳、木屑、平菇菌糠4种不同培养基质上的CMC酶活和MnP酶活指标,证明嗜热霉菌和嗜热放线菌菌株在巴西蘑菇菌糠基质上比在其它3种基质上生长的更好,同时筛选出可以高效分解木质纤维素的嗜热霉菌菌株M2、M22和M28和嗜热放线菌菌株AG4、BG23和FG25。实验结果显示这6株嗜热菌的CMC酶活和MnP酶活明显受到培养基的水分含量和pH值的影响。其中, M2菌株在pH7、水分含量为54%的培养基上酶活最高,M22菌株在pH9、水分含量为54%~62%的培养基上酶活最高,M28菌株在pH9、水分含量为62%的培养基上酶活最高,AG4菌株在pH7、水分含量为62%的培养基上酶活最高,BG23菌株在pH9、水分含量为54%的培养基上酶活最高,FG25菌株在pH9、水分含量为54%的培养基上酶活最高。 研究了筛选出的降解木质纤维素能力较强的3株嗜热霉菌和3株嗜热放线菌的组合培养情况以及培养基质(即巴西蘑菇菌糠)的配方优化。结果表明培养基中添加辅料有利于菌株培养产物CMC酶活和MnP酶活的提高。培养基中添加5%小麦麸皮M2菌株的酶活较高;培养基中添加10%玉米粉或15%小麦麸皮M22菌株的酶活较高;培养基中添加10%玉米粉或小麦麸皮M28菌株的酶活较高;培养基中添加10%小麦麸皮AG4菌株的两种酶活指标都相对较高;培养基中添加10%小麦麸皮BG23菌株的CMC酶活较高,在其中添加10%或15%小麦麸皮BG23菌株的MnP酶活较高;培养基中添加15%玉米粉或小麦麸皮FG25菌株的酶活较高。比较3种辅料对培养效果的影响,选用小麦麸皮作为添加辅料,更有利于菌株培养时间的缩短和有效活菌数的增加。通过正交试验确定了嗜热霉菌M2、M22和M28菌株组合培养的最优培养条件为培养基水分含量62%、小麦麸皮添加量15%、pH9、培养时间5 d;嗜热放线菌AG4、BG23和FG25菌株组合培养的最优培养条件是培养基水分含量62%、小麦麸皮添加量15%、pH7、培养时间7 d。