金针菇中HOG信号通路响应低温刺激的研究

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金针菇作为典型的低温型变温结实性食药用菌之一,能够在寒冷的冬天正常出菇,但目前其低温应答机制还不清楚。本课题基于实验室已完成的金针菇基因组及转录组测序结果,根据酿酒酵母的HOG-MAPK通路的研究报道,依托于多种生物信息学软件,构建了金针菇中能够应答低温胁迫信号的HOG-MAPK途径,以期能揭露金针菇需要低温诱导出菇的机制。更为进一步改良金针菇品种,降低其工厂化栽培消耗能源,提供分子方面的帮助。实验结果表明,金针菇中具有HOG-MAPK信号途径的相关蛋白,主要包括有被称为双组份系统的类似组氨酸激酶感应蛋白2CHK、磷酸转移过渡体FvYpd1和反应调节蛋白FvSsk1和FvSkn7,还包括磷酸化受体激酶(即MAPKs级联途径)FvSsk2、FvPbs2A、FvPbs2B、FvHog1,转录调控因子(转录辅助因子)FvGpd1、FvGlo1、FvHsp12、FvSko1、FvSfa1、FvTsa1等组分。通过对上述通路中各成员的保守结构域预测、系统发育进化分析及其他基本蛋白功能预测等生物信息学分析,结果都证实了实验结果中对金针菇HOG-MAPK途径的注释具有较高的可靠性和科学性。与此同时,实验中对各基因启动子元件的分析也支持该通路应答低温胁迫的可能性。实验对金针菇菌丝进行低温胁迫处理,并利用实时荧光定量PCR技术对处理后的菌丝可能存在的HOG-MAPK信号途径的相关蛋白编码基因进行检测,结果表明:金针菇同样存在HOG-MAPK通路且能够应答低温胁迫。在对金针菇HOG-MAPK通路在不同温度冷激诱导下各基因的表达水平检测发现,金针菇该通路的低温应答在30分钟内有较为剧烈的波动期,30分钟后基本处于动态平衡状态;而且,金针菇HOG-MAPK通路下游的作为合成细胞保护性物质甘油、小热激蛋白的关键基因FvGpd1、FvHsp12的表达量明显提高。实验结果证明了金针菇中HOG-MAPK通路的存在并初步阐明了其应答低温胁迫的机制。
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