【摘 要】
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蜂胶是一种天然的活性物质,是蜜蜂从植物的芽苞和树干采集的树脂,混入蜜蜂的上颚腺分泌物、花粉和蜂蜡等经咀嚼和加工成的一种具有芳香气味的固形物。蜂胶具有抗菌消炎、抗氧化、抗肿瘤、抗糖尿病等生物活性,这些活性与蜂胶的化学成分密切相关。蜂胶化学成分复杂,蜜蜂在不同气候条件下采集的植物树脂不同,因此来自不同地区蜂胶中的化学成分存在差异,进而导致蜂胶生物活性的不同。中国是世界上重要的蜂胶产地之一,其蜂胶化学成
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蜂胶是一种天然的活性物质,是蜜蜂从植物的芽苞和树干采集的树脂,混入蜜蜂的上颚腺分泌物、花粉和蜂蜡等经咀嚼和加工成的一种具有芳香气味的固形物。蜂胶具有抗菌消炎、抗氧化、抗肿瘤、抗糖尿病等生物活性,这些活性与蜂胶的化学成分密切相关。蜂胶化学成分复杂,蜜蜂在不同气候条件下采集的植物树脂不同,因此来自不同地区蜂胶中的化学成分存在差异,进而导致蜂胶生物活性的不同。中国是世界上重要的蜂胶产地之一,其蜂胶化学成分也被广泛的研究。因为中国产胶地众多,地域跨度大,所以化学成分也存在不同。目前广泛研究的是分布于温带地区的的杨树型蜂胶,缺少对其他地区的蜂胶系统性的研究。因此,本文通过百余个全国不同地域蜂胶样品的检测分析发现中国蜂胶的成分特点符合中国植被区划的分类,继而通过中国植被分类找出东北三省蜂胶的特征成分;通过化学分析法和HPLC法对山东蜂胶(杨树型蜂胶)和吉林蜂胶成分进行对比、找出差异;用层析方法制备出东北蜂胶高纯度特征性成分,用质谱和核磁进行结构鉴定;建立基于特征性成分(P-香豆酸苄酯)的东北蜂胶HPLC的检测方法;最后采用细胞模型对P-香豆酸苄酯的抗缺血再灌注损伤的活性进行了简单的研究,揭示了P-香豆酸苄酯的神经保护作用。1、全国24个省市自治区随机采集的134个蜂胶毛胶样品,采用超声波辅助甲醇提取对蜂胶进行提取,采用HPLC-DAD和标准品进行比对分析,通过对蜂胶醇提物谱图特征和成分的分析,结合中国植被区划图,建立一个中国蜂胶的快速分类方法,把中国蜂胶分为四大类,同时发现了东北蜂胶的特征性成分(物质A)。2、通过HPLC-DAD和标准品对定地采集的东北吉林地区的蜂胶和山东地区的蜂胶成分进行定性分析,在相同高效液相上样质量的情况下,山东蜂胶和吉林蜂胶的HPLC谱图在320 nm上区别主要体现在以下五种成分:咖啡酸、p-香豆酸、咖啡酸苯乙酯、物质A和咖啡酸肉桂酯。这五个物质中,咖啡酸和p-香豆酸是山东蜂胶和东北蜂胶都存在的共有成分,但是在320 nm上可以明显的从峰高和峰面积上看出明显差异。咖啡酸苯乙酯和咖啡酸肉桂酯是山东蜂胶特有的成分。物质A是吉林蜂胶特有的成分。3、东北蜂胶甲醇提取物通过薄层层析、中压层析、制备液相色谱和高效液相色谱的技术的结合运用,制备出纯度超过99%的东北蜂胶特征成分A,通过质谱和核磁的检测与分析,鉴定出此化合物为p-香豆酸苄酯。4、通过大量实验优化出检测p-香豆酸苄酯最佳的样品预处理方法和HPLC条件。建立了一种基于p-香豆酸苄酯的蜂胶HPLC快速检测方法,并经过了方法学验证。通过本方法检测24种东北不同地域蜂胶中p-香豆酸苄酯的含量,得到的含量测定结果与上文的蜂胶分类结果一致,为蜂胶的分类提供了依据。5、通过对N2a细胞进行OGD四小时并复糖复氧二十四小时为模型模拟体内脑缺血再灌注损伤,以细胞存活率和细胞形态为检测指标,对比阳性对照川芎嗪发现p-香豆酸苄酯具有体外抗N2a细胞缺血再灌注损伤的作用,为发掘东北地区蜂胶神经保护活性提供了依据。
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