目的:湿证具有明显的地域聚集性,广东地区由于特殊的地理位置,气候环境较潮湿,湿证发病率较高。湿分为外湿和内湿,由于气候环境过于潮湿,人体正气不足,外感湿邪所造成的病证称为外湿。由于饮食不节,脏腑功能失调,气机输布不利,津液流动不畅所引起的病证称为内湿。外湿与内湿可以相互转化,相互影响。外湿日久,阻滞气机,使得津液运行失常,湿邪内生。内湿日久,脏腑机能受损,人体正气不足,易受外湿侵袭而感邪。湿为阴邪,易伤阳气。湿性缠绵,日久难愈。湿的这两种特性使得湿病的治疗周期长,病程中变数多,容易由实转虚。而湿邪所致的阳气虚损可能与线粒体能量代谢有关。众所周知,线粒体是能量代谢的主要场所,炎症反应需要消耗能量,能量不足也会影响炎症反应的进程。线粒体DNA可以作为一种危险相关的分子模式,通过线粒体外膜传递信号分子(如RIG-I信号通路中的MAVS信号分子,NLRP3炎症小体)。线粒体生物发生、融合和分裂在免疫细胞活化方面起着重要作用。三羧酸循环中间体参与免疫和炎症相关的过程,影响先天免疫和适应性免疫。外湿和内湿相互转化的生理基础是什么?外湿和内湿是否有共同的致病机制?课题组前期的实验中,我们发现用人工气候箱模拟的高温高湿环境能够改变小鼠的肠道菌群组成结构,引起菌群移位及免疫炎症反应。因此我们猜测高湿及高温高湿环境能够通过改变肠道菌群结构及功能对线粒体的结构和功能产生影响进而引起机体的功能紊乱。本实验通过人工气候箱,模拟高湿环境及高温高湿环境,探索外感湿邪及外感湿热对机体带来的短期影响及变化规律。研究方法:使用人工气候箱模拟高湿环境及高温高湿环境,构建小鼠的外感湿邪,外感湿热的动物模型,观察7、14天的变化。高湿组给予温度22±2℃、相对湿度85±5%,12 h(昼);以及22±2℃、相对湿度60%,12 h(夜),昼夜交替的环境暴露。高温高湿组给予温度33±2℃、相对湿度85±5%,12 h(昼);以及22±2℃、相对湿度60±5%,12 h(夜),昼夜交替的实验条件。观察小鼠的活动情况,在取材前一天收集小鼠粪便,用于肠道菌群检测。取材时收集小鼠的结肠组织冻存,使用PCR技术检测小鼠结肠组织内的线粒体含量。研究结果:高湿环境及高温高湿环境均会导致小鼠活动度下降,喜抱团蜷卧,纳呆等。高湿组小鼠在第7天,14天与相应的正常组相比,肠道菌群多样性均下降。而高温高湿组的这种变化则显得轻微一些。高湿环境及高温高湿环境下,小鼠肠道菌群中脱铁杆菌门(Deferribacteres)的相对丰度均下降,Bacteroides acidifaciens 与 Mucispirillum schaedleri减少。高湿环境下,小鼠肠道菌群第7天拟杆菌门(Bacteroidetes)显著减少,厚壁菌门(Firmicutes)显著增加,而高温高湿环境下,小鼠肠道菌群中在第14天才出现这种趋势。线粒体含量方面,二组小鼠肠组织中的线粒体含量均在第7天上升,并在第14天恢复。结论:显然,短期的高湿环境与高温高湿环境暴露能够改变小鼠的肠道菌群结构与数量,线粒体相对拷贝数先上升后恢复。这说明肠道菌群对高湿环境与高温高湿环境有较高的敏感度。同时,在湿邪侵犯机体的早期,线粒体相对拷贝数的波动性变化也揭示了湿引起能量代谢紊乱的实质。肠道菌群或许能够成为我们发现湿证的早期征兆,成为预测病情进展的动态指标。