磷酸吡哆醛（Pyridoxal-5’-phosphate,PLP）是由维生素B6与磷酸结合形成的,是维生素B6的主要辅酶形式,还是140多种细胞酶的辅酶,在生物体内发挥广泛、重要的作用。目前PLP的合成方法有化学合成法和酶催化合成法,利用基因工程手段研究PLP产量的较少。所以本文以基因工程手段为基础,在大肠杆菌体内构建表达载体,并优化发酵条件,提高PLP的产量。主要研究结论如下:（1）本课题以实验室保藏的E.coli K12基因组为模板,通过PCR反应扩增磷酸吡哆醛（PLP）合成过程中的关键酶基因pdxj,以pETDuet-1质粒为载体构建表达载体pETDuet-1-pdxj。以野生型E.coli BL21为出发菌株,将重组质粒导入E.coli BL21感受态细胞,得到工程菌株E.coli BL21/pETDuet-1-pdxj。（2）以构建得到的重组质粒pETDuet-1-pdxj为载体,通过PCR体系扩增关键酶基因zwf-dxs,将其作为目的基因片段连接到载体质粒pETDuet-1-pdxj上,得到重组质粒pETDuet-1-pdxj-zwf-dxs。以实验室保藏的野生型E.coli BL21为出发菌株,得到基因工程菌株E.coli BL21/pETDuet-1-pdxj-zwf-dxs。通过SDS-PAGE蛋白电泳验证,三个关键酶基因在细胞内高效表达相应蛋白。（3）以野生型E.coli BL21菌株作对照,确定两菌株发酵液中PLP的产量差异显著,并对工程菌株的发酵培养基和发酵条件在摇瓶水平上进行优化。设计单因素实验和Two level factorial试验,筛选出对PLP发酵过程影响最显著的因子,分别为葡萄糖浓度,酵母浸膏浓度和培养基初始p H。用三个显著因子设计Box-Behnken响应面实验,通过回归方程分析获得显著影响因子的最佳组合条件:葡萄糖浓度34.89g/L,酵母浸膏浓度31.17g/L,初始p H10.07时,PLP的预测产量为2.49g/L。对上述结果进行验证试验,得到PLP的产量为2.23g/L。在1L摇瓶条件下,制作PLP的发酵曲线,最终确定发酵培养时间为12h,发酵液中PLP的产量为2.32g/L。对比E.coli BL21菌株,PLP的产量提高了38.76倍左右,确定得到磷酸吡哆醛（PLP）高产菌株E.coli BL21/pETDuet-1-pdxj-zwf-dxs。