论文部分内容阅读
本试验以野葛为原料,探索了野葛中异黄酮的提取、纯化及水解工艺,从而为葛根异黄酮的利用和生产提供参考。分别采用亚临界水法和超声辅助提取法这两种方法提取葛根异黄酮,并对这两种提取方法进行了比较。接下来运用超滤技术对葛根总异黄酮粗提物进行初步纯化。然后分别采用盐酸和"Amano"β-葡萄糖苷酶水解超滤纯化后的葛根总异黄酮产品,使其水解为葛根素和黄豆苷元。最后用高速逆流色谱对异黄酮水解产物进行纯化,得到了高纯度的葛根素和黄豆苷元。采用亚临界水法提取葛根中的总异黄酮,通过单因素及正交试验确定其最优工艺为提取时间为30min、提取温度为130℃C、压力为0.9MPa、液料比为25mL/g,在此条件下葛根总异黄酮得率为7.85%。采用超声辅助提取法提取葛根中的总异黄酮,通过单因素及正交试验确定其最优工艺为提取时间为45min、提取温度为50℃C、乙醇浓度为70%、超声功率为400W、液料比为30mL/g,在此条件下葛根总异黄酮的得率为6.76%。对亚临界水法和超声辅助提取法进行比较,结果表明：亚临界水法提取葛根异黄酮较超声辅助提取法更省时、更高效、更环保。采用超滤技术对葛根总异黄酮粗提物进行初步纯化,确定了纯化条件为：选择截留分子量为5000的聚醚砜膜,超滤压力选择68kPa,超滤温度为40℃C。在此条件下,总固形物截留率为80.6%,葛根总异黄酮固态产品的质量分数由超滤前的24.9%提高到36.2%。采用盐酸水解经超滤纯化的葛根异黄酮产品,通过单因素及正交试验确定其最优水解工艺。结果表明：水解葛根素糖苷的最佳工艺为水解时间为7h、盐酸浓度为4mol/L、水解温度为70℃C,在此条件下葛根素水解得率为92.8%；水解黄豆苷的最佳工艺为水解时间为7h、盐酸浓度为4mol/L、水解温度为50℃C,在此条件下黄豆苷元的水解得率为95.1%。采用"Amano"p-葡萄糖苷酶水解经超滤纯化的葛根异黄酮产品,通过单因素及正交试验确定其最优水解工艺。结果表明：水解葛根素糖苷的最佳工艺为水解时间为120min、酶液浓度为40mg/L、水解温度为45℃、体系pH为4.5,在此条件下葛根素水解得率为93.9%;水解黄豆苷的最佳工艺为水解时间为120min、酶液浓度为40mg/L、体系pH为4.5、水解温度为50℃C,在此条件下黄豆苷元的水解得率为96.2%。对两种水解方法进行比较,结果表明：采用"Amano"p-葡萄糖苷酶水解葛根异黄酮较酸法水解,反应条件更温和、反应时间更短、异黄酮苷元得率更高。采用高速逆流色谱对葛根异黄酮水解产物进行分离纯化,确定了色谱条件,即分离葛根素采用采用正丁醇-乙酸乙酯-水(1：4：5,v/v/v)溶剂系统,分离葛根素和黄豆苷元采用氯仿-甲醇-水(4：3：2,v/v/v)溶剂系统,将所得葛根素和黄豆苷元两流分用HPLC检测均表现为单一的色谱峰,其质量分数分别为99.0%和92.5%。